[发明专利]香菇多糖组合物中香菇多糖含量的测定方法

说明书

一种香菇多糖组合物中香菇多糖含量的测定方法，包括：采用高效液相色谱法对香菇多糖组合物样品供试溶液进行洗脱，然后进行香菇多糖含量的测定。该方法能够有效排除右旋糖酐等辅料对香菇多糖含量测定的影响，提高了含量测定的精确性，适用于各种香菇多糖制剂的含量测定。

技术领域

本发明涉及香菇多糖组合物中香菇多糖的含量测定方法，特别涉及含有对定量测定有干扰的辅料的香菇多糖制剂的含量测定。

背景技术

香菇多糖(Lentinan)是从香菇中提取的具有生物活性的多糖，其一级结构是以β-(1→3)-连接的葡萄糖为主链，在部分葡萄糖基的6位取代有单个β-D-葡萄糖基侧链的葡聚糖。香菇多糖是一种免疫调节剂，用于恶性肿瘤的辅助治疗。香菇多糖对多种肿瘤有抑制作用，特别是消化道类的肿瘤。香菇多糖最早于1965年由日本的千原吴郎报道其具有抗肿瘤活性，1985年日本首先批准注射用香菇多糖作为抗肿瘤新药上市。

目前已上市的香菇多糖制剂主要为注射剂，特别是冻干粉针剂。多糖的含量测定方法常用蒽酮-硫酸分光光度法和滴定法，注射用香菇多糖国家标准采用滴定法测定其中香菇多糖的含量。

蒽酮-硫酸分光光度法的原理是多糖类遇浓硫酸水解并脱水生成糠醛或其衍生物，再与蒽酮试剂缩合产生呈色物质，反应后溶液呈蓝绿色或青绿色，在625nm处有最大吸收，吸光度与多糖含量呈线性关系。滴定法是基于将香菇多糖溶解后用滴定法测定还原糖的含量。

香菇多糖制剂中大多采用右旋糖酐等作为辅料，而且辅料的用量通常为主药的数倍乃至数十倍。右旋糖酐也是属于多糖类，会干扰蒽酮硫酸法的结果。而且，含有右旋糖酐等糖类辅料的制剂也不适合采用滴定法测定，因为右旋糖酐与香菇多糖一样会水解为单糖，滴定法并不能区分单糖是来自于香菇多糖还是右旋糖酐。

王国佳等(《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》，2012年第10期，第E057-591页)进行了香菇多糖注射制剂质量标准的系统化研究，采用蒽酮比色法测定香菇多糖注射液和注射用香菇多糖的含量，以及使用HPLC-RID法测定香菇多糖注射制剂中香菇多糖的含量，所用色谱柱为TSKgelG5000PWxl、G4000PWxl、G3000PWxl凝胶柱。

Chen等(《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》，2013年，第78-79卷第9期，第176-182页)使用HPSEC-RID-MALSD法测定香菇多糖注射制剂的含量，所用的色谱柱为TSKgelG6000PWxl和G4000PWxl凝胶柱。

研究发现，现有的方法均无法准确测定制剂中香菇多糖的含量，无法满足药品质量可控性要求，严重影响药品质量控制及安全性。因此，亟需开发一种能够准确、有效地测定香菇多糖制剂中香菇多糖的含量的方法。

发明内容

除右旋糖酐以外，香菇多糖制剂中还常用甘露醇、山梨醇等辅料。发明人经研究发现，在现有的上述测定方法中，山梨醇以及甘露醇辅料在测定中呈不同程度的显色，会抑制香菇多糖的显色，会严重干扰香菇多糖含量的测定。

发明人采用王国佳、Chen等披露的方法对香菇多糖制剂中香菇多糖的含量进行测定，仍无法获得准确的测量结果。

香菇多糖的平均分子量范围在30-70万之间，分子量在2-100万均有分布，与右旋糖酐等辅料分子量相互重叠。用于糖类分析的色谱柱包括：用于分析单、寡糖分析的氨基柱，阴离子交换柱和基于分子量大小的分子排阻色谱柱等。发明人研究发现，现有的方法无法使香菇多糖与右旋糖酐等辅料实现基线分离。因此，现有的方法无法准确地对注射用香菇多糖中的香菇多糖的含量进行测定。发明人尝试优化流动相，仍未能获得令人满意的测定结果。

发明人经反复研究发现，采用填料为一定孔径的、表面键合亲水薄膜的硅胶色谱柱进行层析时，香菇多糖与右旋糖酐等辅料可实现基线分离，能够准确、有效地对香菇多糖制剂中香菇多糖含量进行测定，从而完成了本发明。