[发明专利]一种从北葶苈子中提取硫苷黄酮类化合物的方法及其应用

权利要求书

1.一种从北葶苈子中提取硫苷黄酮类化合物北葶新黄酮A、北葶新黄酮B，分子结构式为：

2.权利要求1所述的从北葶苈子中提取硫苷黄酮类化合物的方法，其特征在于，将北葶苈子230-260℃炒制5-6min，炒制后，每次加北葶苈子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合并三次提取液，减压浓缩至相当于含生药2g/mL的浸膏状，在室温条件下，浸膏加入浸膏5倍体积量、体积浓度为80％的乙醇醇沉，静置1h，将上清液倒出，再次加入浸膏5倍体积量、体积浓度为80％的乙醇醇沉，如此反复操作4次，合并上清液，浓缩至无醇味，上DianionHP-20柱，依次用水、体积浓度20％、40％、60％乙醇梯度洗脱，流速6mL/min，每个部位的流动相用量为柱体积的10倍；收集60％乙醇洗脱液，浓缩干燥，得60％乙醇洗脱部位组分A；组分A用组分A 5倍重量的水溶解，在20℃下6000r/min离心15min，所得上清液记为水溶物组分B1，离心之后的沉淀记为水不溶物组分B2；组分B2用甲醇溶解，硅胶拌样，组分B2与硅胶重量比1:1，以二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相梯度洗脱，流速10mL/min，所用二氯甲烷和甲醇混合液的比例依次为100:0、20:1、10:1、5:1、1:1，每200ml检识一次，每个梯度流动相的用量以茴香醛-浓硫酸薄层检识来判断，3d洗脱完毕，合并二氯甲烷：甲醇＝20:1的流份，标为组分C2；组分C2用70％甲醇溶解，通过Sephadex LH-20柱色谱，用70％甲醇洗脱，流速0.8mL/min，以茴香醛-浓硫酸薄层检识，合并210-240mL的流份标为组分F4，组分F4用半制备HPLC分离，上规格型号：250×10mm、粒径5μm、孔径12nm的YMC-Pack ODS-AA色谱柱，流动相为体积比25：75的乙腈：三氟乙酸水溶液，三氟乙酸水溶液质量浓度为0.03％，流速3ml/min，收集保留时间t_R＝32.0～33.0min的流份，浓缩干燥，得化合物北葶新黄酮A，收集保留时间t_R＝38.0～39.0min的流份，浓缩干燥，得化合物北葶新黄酮B。

3.根据权利要求2所述的从北葶苈子中提取硫苷黄酮类化合物的方法，其特征在于，取北葶苈子10kg，240℃炒制5.5min，炒制后，每次加北葶苈子10倍重量的水煎煮提取三次，每次1.5h，合并三次提取液，减压浓缩至相当于含生药2g/mL的浸膏状，在室温条件下，浸膏加入体积浓度为80％的乙醇25L醇沉，静置1h，将上清液倒出，再次体积浓度为80％的乙醇25L醇沉，如此反复操作4次，合并上清液，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱，依次用水、体积浓度20％、40％、60％乙醇梯度洗脱，流速6ml/min，每个部位的流动相用量为柱体积的10倍；收集60％乙醇洗脱液，浓缩干燥，得60％乙醇洗脱部位组分A；组分A用组分A 5倍重量的水溶解，在20℃下6000r/min离心15min，所得上清液记为水溶物组分B1，离心之后的沉淀记为水不溶物组分B2；组分B2用甲醇溶解，硅胶拌样，组分B2与硅胶重量比1:1，以二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相梯度洗脱，流速10ml/min，所用二氯甲烷和甲醇混合液的比例依次为100:0、20:1、10:1、5:1、1:1，每200ml检识一次，每个梯度流动相的用量以茴香醛-浓硫酸薄层检识来判断，3d洗脱完毕，合并二氯甲烷：甲醇＝20:1的流份，标为组分C2；组分C2用70％甲醇溶解，通过Sephadex LH-20柱色谱，用70％甲醇洗脱，流速0.8ml/min，以茴香醛-浓硫酸薄层检识，合并210-240mL的流份标为组分F4，组分F4用半制备HPLC分离，上规格型号：250×10mm、粒径5μm、孔径12nm的YMC-Pack ODS-AA色谱柱，流动相为体积比25：75的乙腈：三氟乙酸水溶液，三氟乙酸水溶液质量浓度为0.03％，流速3ml/min，收集保留时间t_R＝32.0～33.0min的流份，浓缩干燥，得化合物北葶新黄酮A，收集保留时间t_R＝38.0～39.0min的流份，浓缩干燥，得化合物北葶新黄酮B。

4.权利要求1所述的硫苷黄酮类化合物北葶新黄酮A和北葶新黄酮B在制备雌激素样作用药物中的应用。