[发明专利]一种以白术内酯Ⅱ为促增殖剂的CIK细胞培养基

说明书

本发明公开了一种以白术内酯Ⅱ为促增殖剂的CIK细胞培养基，包括无血清培养基，该无血清培养基中含有有效浓度的白术内酯Ⅱ。所述无血清培养基为RPMI 1640，所述白术内酯Ⅱ在无血清培养基中的浓度为10‑100μM。本发明发现白术内酯Ⅱ可以提高CIK细胞的增殖率，提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，可以制备成CIK细胞培养基用于CIK细胞的培养增殖，以保证患者在放射治疗和化学治疗后能够回输足量的CIK细胞。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，涉及CIK细胞的诱导培养，具体涉及一种以白术内酯Ⅱ为促增殖剂的CIK细胞培养基。

背景技术

过继性细胞免疫治疗是指将免疫细胞分离，在体外诱导扩增产生大量免疫细胞后，将细胞回输到患者体内进行治疗的一种手段。细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一群具有细胞毒性的T淋巴细胞，为膜蛋白分子表型特点为CD3+CD56+的异质群体细胞，具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性、自然杀伤(NK)细胞的非主要组织相容性复合体限制性及对正常细胞低毒性的优点，可清除手术、放化疗后残余的癌细胞及微小病灶，降低放、化疗毒副作用，提高生存质量，延长生存期。目前，国内在肿瘤免疫治疗方面以CIK细胞治疗最为广泛。

对于CIK细胞免疫治疗，临床上采用体外培养手段使CIK细胞大量增殖。为保证患者在放射治疗和化学治疗后能够回输足量的CIK细胞，有必要开发一种既能诱导CIK细胞成熟促进其增殖效率又不干扰其杀瘤活性的细胞培养基。

白术内酯Ⅱ为白术中的一种化合物，与白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ为白术中的主要内酯成分。其化学结构式如下，生源上白术内酯Ⅲ为白术内酯Ⅰ的氧化产物，白术内酯Ⅱ为白术内酯Ⅲ的脱水产物。通常认为，白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ为白术的主要活性成分，是其抗炎和抗癌有效成分(参考文献：白术内酯类成分及其药理作用研究进展，中国药房2012年第23卷第39期)。

申请人发现白术内酯Ⅱ有诸多特别的、不同于白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以白术内酯Ⅱ为促增殖剂的CIK细胞培养基。

实现本发明上述目的技术方案如下：

一种以白术内酯Ⅱ为促增殖剂的CIK细胞培养基，包括无血清培养基，该无血清培养基中含有有效浓度的白术内酯Ⅱ。

优选地，所述无血清培养基为RPMI 1640。

优选地，所述白术内酯Ⅱ在无血清培养基中的浓度为10-100μM。

白术内酯Ⅱ在制备用于促进CIK细胞增殖、提高其杀瘤活性的试剂方面的用途。

本发明的突出优点：

本发明发现白术内酯Ⅱ可以提高CIK细胞的增殖率，增强CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，可以制备成CIK细胞培养基用于CIK细胞的培养增殖，以保证患者在放射治疗和化学治疗后能够回输足量的CIK细胞。

附图说明

图1为各组CD3+CD56+表型细胞(即CIK细胞)的占比比较；

图2为各组细胞对乳腺癌细胞的杀伤率(效靶比20:1)比较。

具体实施方式

下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。

一、实验材料

白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ自制，纯度大于98％。

二、实验方法

1、外周血单个核细胞(PBMC)的分离