[发明专利]基于三维微组织水平的抗肿瘤药物筛选试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.基于三维微组织水平的抗肿瘤药物筛选试剂盒，其特征在于，包括三维细胞培养材料；组织细胞分散试剂；蛋白酶抑制剂；基础细胞培养基；血清；抗生素；平衡盐溶液；细胞活力检测试剂；细胞过滤网。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述三维细胞培养材料包括悬浮培养板，悬滴培养板，微流体三维培养板及配套装置，水凝胶，三维培养用磁珠及配套装置，固体三维支架材料，细胞培养板中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述三维细胞培养材料为3D微孔悬浮培养板，或以多糖和/或多肽为主要成分的水凝胶和细胞培养板配合使用。

4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，

所述组织细胞分散试剂为胰蛋白酶，EDTA-胰蛋白酶，胶原酶，中性蛋白酶，链霉蛋白酶，木瓜蛋白酶，DNA酶，透明质酸酶，胰液素，TrypLE，Trypzean，Liberase，Blendzyme，Accutase中的一种或多种；所述蛋白酶抑制剂为胰酶中和液，抑肽酶，抗蛋白酶肽，胰酶抑制剂，蛋白酶抑制剂的一种或多种；

所述基础细胞培养基包括：BME细胞培养基，IMDM细胞培养基，RMPI 1640细胞培养基，MEM细胞培养基，DMEM细胞培养基，F10细胞培养基，F12细胞培养基，DMEM/F12细胞培养基，McCoy's 5A细胞培养基，199细胞培养基，Fisher’s细胞培养基，CMRL细胞培养基，GMEM细胞培养基，Leibovitz's L-15细胞培养基，MCDB 131细胞培养基，Ames'细胞培养基中的一种或多种；

所述血清包括：牛血清，马血清，马血清，兔血清，鸡血清，猪血清，其他动物血清，合成血清替代品，血清替代物中的一种或多种；所述抗生素包括：青霉素，链霉素，庆大霉素，放线菌素，新霉素，卡那霉素，多粘菌素，制霉菌素，两性霉素中的一种或多种；所述平衡盐溶液包括PBS，D-PBS，Hank’s，D-Hank’s，EBBS中的一种或多种；所述细胞过滤网包括：无菌纱布，塑料细胞过滤网，金属细胞过滤网和/或其他材质的网状纤维中的一种或多种；

所述细胞活力检测试剂包括：alamarBlue，台盼蓝，MTT试剂，XTT试剂，WST-1试剂，CCK-8试剂，live/dead细胞活力检测试剂中的一种或多种。

5.权利要求1-4任一所述试剂盒的使用方法，其特征在于，首先，将病人肿瘤组织进行分散，得到的组织块、组织碎片、细胞团、和/或分散的单个细胞；然后，将分散后的病人肿瘤组织、细胞样本通过三维培养的方法进行培养，使细胞在三维空间中生长，形成具有球形的和/或不规则的立体形状的三维结构；最后，用三维培养得到的肿瘤微组织进行药敏测试。

6.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

1)将来自病人的新鲜组织样本浸泡于抗生素溶液中进行消毒，并用平衡盐溶液清洗；

2)用组织细胞分散试剂消化细胞间质；

3)用细胞过滤网过滤，得到直径为10～500μm的细胞团或独立分散的细胞；

4)将细胞接种在三维培养材料表面和/或内部，添加细胞培养基，进行三维细胞培养；

5)用待测的抗肿瘤药物溶液处理细胞；

6)用细胞活力检测试剂处理细胞；

7)用酶标仪、细胞计数器、激光共聚焦显微镜和/或流式细胞仪对处理过的细胞进行数据的采集；

8)利用采集到的信号和/或数据分析细胞活力，得到抗肿瘤药物对肿瘤细胞的抑制效果结论。

7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，血清的浓度为0％～99.9％之间的任意范围；抗生素的浓度为0.00001mg/mL～10000mg/mL之间的任意范围。

8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，血清的浓度为5％～20％之间的任意浓度；抗生素的浓度为0.001mg/mL～100mg/mL。

9.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述步骤4)中三维细胞培养中，所述三维培养材料为3D微孔悬浮培养板，使细胞终浓度为3000～8000个/微孔；或三维培养水凝凝胶，使细胞终浓度为5万～25万个/mL。

10.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述步骤4)三维细胞培养的持续时间大约为1～7天。