[发明专利]一种表达阿达木单抗的联合培养基及其应用

权利要求书

1.一种表达阿达木单抗的联合培养基，其特征在于，由基础培养基和补料培养基组成，基础培养基与补料培养基的体积百分数分别为：55％-75％和25％-45％；

其中基础培养基由溶液A和溶液B组成，溶液A:B的体积比为1：0.5-1.5，其中溶液A中成分为20-28g/L CD FortiCHO、0.9-1.2g/L poloxamer 188和4-8g/L葡萄糖，其余成分为水；溶液B中成分为20-28g/L M20A，其余成分为水；

其中补料培养基由溶液C和溶液D组成，溶液C:D的体积比为5-15：1，其中溶液C中成分为150-200g/L F001S，其余成分为水；其中溶液D中成分为50-100g/L F001B，其余成分为水。

2.根据权利要求1所述的联合培养基，其特征在于，所述基础培养基与补料培养基的体积百分数分别为：65％-75％和25％-35％。

3.根据权利要求1所述的联合培养基，其特征在于，所述溶液A：B的体积比为1:1。

4.根据权利要求1所述的联合培养基，其特征在于，所述的溶液A中成分为24.56g/L CDFortiCHO、1g/L poloxamer 188和5g/L葡萄糖，其余成分为水；溶液B为27.62g/L M20A，其余成分为水。

5.根据权利要求1所述的联合培养基，其特征在于，所述溶液C：D的体积比为10：1。

6.根据权利要求1所述的联合培养基，其特征在于，所述溶液C中成分为164.9g/L的F001S，其余成分为水；其中溶液D中成分为76g/L F001B，其余成分为水。

7.一种权利要求1所述的联合培养基的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：

1)称取CD FortiCHO固体培养基，poloxamer188和葡萄糖溶解于水中，配制成溶液A；

2)称取M20A固体培养基，溶解于水中，配制成溶液B；

3)将溶液A和B以1:0.5-1.5的体积比混合，得到基础培养基；

4)称取F001S和F001B，分别溶解于水中，配制成溶液C和D，将溶液C和D按照体积比5-15:1组成补料培养基，此时溶液C和D不能预先混合；

5)步骤3)中基础培养基与步骤4)中所述补料培养基共同组成了联合培养基。

8.一种应用权利要求1所述联合培养基的阿达木单抗细胞培养方法，其特征在于，所述细胞培养方法由以下步骤组成：

a)向所述基础培养基中接种阿达木单抗细胞株，初始接种密度为3-7×10⁵cells/ml；在温度36-38℃下培养12-36小时后，根据基础培养基中葡萄糖的浓度4-8g/L，加入补料培养基，加入方式为流加，流加量保证葡萄糖浓度和其他营养物质水平的稳定；

b)当活细胞密度达到12-18×10⁶cells/ml，将培养温度降至33-34℃；

c)其他培养参数为：pH 7.0±0.2、溶氧30-50.0％、初始转速60-100rpm，表层通气量为0.2-1lpm，深层通气量为0.2-1lpm，培养10-15天后，得到所述阿达木单抗细胞培养液，进行单抗纯化步骤，得到所述阿达木单抗。

9.根据权利要求8所述的联合培养基的阿达木单抗细胞培养方法，其特征在于，所述表达细胞为CHO细胞。

10.根据权利要求8所述的联合培养基的阿达木单抗细胞培养方法，其特征在于，所述流加速度为600～800ml/min。