[发明专利]一种腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗及其生产方法

权利要求书

1.一种腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗，其特征在于所述疫苗含有采用大肠杆菌表达的重组腐败梭菌α毒素蛋白；

所述重组腐败梭菌α毒素蛋白，与野生型腐败梭菌α毒素成熟毒素相比，含有4个氨基酸突变，分别为第54位半胱氨酸突变为亮氨酸，第264位天冬酰胺突变为丙氨酸，第269位组氨酸突变为丙氨酸，第310位色氨酸突变为丙氨酸；同时，在突变蛋白的C端加上6组氨酸标签；

所述疫苗的制苗用菌种为重组表达产气荚膜梭菌α毒素蛋白的大肠埃希氏菌被命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21/mCSA株，该菌株已于2017年09月21日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.14650。

2.如权利要求1所述腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗，其特征在于所述重组腐败梭菌α毒素蛋白，其重组表达载体的基因序列经过密码子优化，更易于在大肠杆菌中实现高表达。

3.如权利要求1所述腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗，其特征在于所述重组腐败梭菌α毒素蛋白为无毒突变体，大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险。

4.如权利要求1所述腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗，其特征在于该疫苗是用所述表达腐败梭菌α毒素重组蛋白的大肠埃希氏菌BL21/mCSA株作为疫苗生产菌株，经发酵培养、诱导表达、菌体破碎、包涵体分离纯化后，加双相油佐剂混合制成。