[发明专利]一种蓝色溶酶体标记荧光试剂的纯化新工艺

说明书

本发明公开了一种蓝色溶酶体标记荧光染料9，10‑双氨基甲基(N，N‑二甲基‑氨基乙基)蒽的纯化新工艺。该工艺采用化学方法，9，10‑双氨基甲基(N，N‑二甲基‑氨基乙基)蒽与氯代甲酸酯反应后提纯，再酸化水解，得到纯度高的产品。该工艺操作简单，产品纯度高，适合大规模生产。

技术领域

本发明涉及一种蓝色溶酶体标记荧光染料9,10-双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽的纯化新工艺，属于生物荧光试剂领域。

背景技术

溶酶体作为细胞结构中重要的细胞器，包含60余种酸性水解酶，对生物体内多种内源性和外源性大分子物质的能够起到重要的消化作用，从而使细胞能够分解其吞噬的各种生物分子。溶酶体在生命体中多种生理过程中，如分泌、质膜修复、细胞信号传导和能量代谢等都起到了重要的调控作用。溶酶体标记探针能够准确定位溶酶体的位置，通过成像，广泛应用于生物医学成像，对生物医学的研究和发展具有重要的意义。9,10-双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽是一种重要的溶酶体荧光标记试剂，发射蓝色荧光，具有如下的结构：

9,10-双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽在缓冲液中的最大吸收波长为371nm，最大发射波长为409nm，溶酶体的标记选择性高，容易进入细胞，广泛用于研究其它波长范围荧光探针对溶酶体的共染性能。

已有的制备方法以9,10-双氯甲基蒽为原料，与N，N-二甲基乙二胺反应得到产物，加入丁烯二酸从乙醇溶液中析出，产品纯度仅有50％左右，难以满足生物医学标记的严格要求。

发明内容

本发明对9,10-双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽的纯化方法进行了深入的研究，提供了一种纯化工艺，所得产品纯度高的，工艺简单。该纯化工艺采用以下化学反应的方法进行：

本发明的创新点在于：粗产品(纯度50％)9,10-双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽与氯甲酸乙酯反应得到保护的衍生物，衍生物经过柱层析纯化，纯净的衍生物在酸的作用下水解，从而得到产品纯度达到98％的9,10- 双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽。该纯化工艺得到的产品纯度高，且方法简单，适合大规模生产。

具体实施方式

实施例1

将3.78克9,10-双氨基甲基(N，N-二甲基-氨基乙基)蒽和2.5克氯甲酸乙酯溶于100毫升干燥的二氯甲烷中，加入4毫升三乙胺，在室温下反应5个小时然后抽滤，真空下除去溶剂，得到固体，用柱层析方法纯化(硅胶300-400 目，流动相：二氯甲烷/甲醇＝5:1)，最后的白色固体1.80克。

实施例2

将上述白色固体1.80克，加入到100毫升水和10毫升浓盐酸中。反应物在搅拌下加热回流5小时，冷却至室温后，有固体析出，过滤后干燥，得到白色固体1.45克，纯度经HPLC分析为98％。