[发明专利]FGF‑18冷冻干燥制剂

说明书

本申请是申请人阿雷斯贸易股份有限公司提交的名为“FGF-18冷冻干燥制剂”的中国专利申请第201280029683.2号的分案，享有欧洲专利申请EP11170437.5和美国专利申请61/499,216的优先权。上述母案是基于PCT申请PCT/EP2012/061495在中国提交的国家阶段申请，有效申请日为2012年6月15日。

发明领域

本发明涉及药物制剂领域。更具体地，针对成纤维细胞生长因子18

(FGF-18)蛋白质的冷冻干燥制剂，及该制剂的制造方法。本发明的冷冻干燥制剂室温下贮存时在相当一段时间内是稳定的。

发明背景

成纤维细胞生长因子18(FGF-18)是成纤维细胞生长因子(FGF)蛋白家族的成员，与FGF-8和FGF-17密切相关。FGF家族成员的特点是肝素结合域。这样一个推定的肝素结合结构域已被确定为FGF-18。据推测，与细胞表面的硫酸肝素蛋白多糖复合的FGF配体与受体结合后，即启动受体介导的信号传递。

已证明，FGF-18是软骨细胞和成骨细胞的增殖剂(Ellsworth ef al.,2002,骨关节炎和软骨，10：308-320；Shimoaka等，2002，J.Bio.Chem.277(9):7493-7500)。有人提出用FGF-18(单独使用(WO2008/023063)或与透明质酸联合使用(WO2004/032849))治疗软骨疾病如骨关节炎和软骨损伤。

含有FGF多肽的药物组合物是本领域已知的。WO00/21548公开了一种药物组合物，该组合物包含与药学上可接受的载体或稀释剂组合的重组FGF。注射用溶液的合适载体或稀释剂的实例包括水或等渗盐溶液。

WO2008/121563涉及药物制剂，这些药物制剂含有以单位剂量注射形式制备的FGF-21化合物和药学上可接受的载体。合适的载体中，可包括糖、缓冲液和/或表面活性剂。

WO92/01442公开了一种冻干组合物，包含FGF、药学上可接受的填充剂和i)纤维素的碱金属盐或ii)聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯与半胱氨酸的组合物。组分i)和ii)使FGF组合物保持稳定。

WO01/39788描述了一种药物组合物，包含FGF-18化合物和细胞毒素，以与药学上可接受载体(例如磷酸盐缓冲盐水)的混合物形式存在。

WO2008/023063公开了包含FGF-18化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或类似物的制剂。作为一个例子，它公开了一种在诸如盐水、葡萄糖溶液、血清白蛋白和Ringer溶液的赋形剂中包含FGF-18的注射用制剂。

当制备含有生物活性蛋白的药物组合物时，所述组合物的配制方式必须使蛋白活性保持一段适当的时间。蛋白质活性/稳定性的丧失，可能由蛋白质化学或物理性质不稳定尤其因蛋白变性、聚合或氧化所引起。因此所产生的产物可能是药学上不可接受的。虽然已知使用赋形剂(s)会增加给定蛋白质的稳定性，但这些赋形剂的稳定化效果高度依赖于赋形剂的性质和生物活性蛋白本身的性质。

仍需要寻求包含FGF-18作为活性成分的进一步的制剂，所述制剂在一段合适的时间内是稳定的和适用于注射，优选为关节内注射。所述制剂可给予患者以治疗软骨疾病，如骨关节炎或软骨损伤。

发明概述

本发明的一个目的是提供一种包含FGF-18蛋白的新制剂。更具体地，所述制剂是含有FGF-18的稳定的冷冻干燥(即冻干)制剂。本发明还提供制备本发明冷冻干燥制剂的方法。本说明书所描述的冷冻干燥制剂在复溶后对于软骨疾病的治疗给药是非常有用的。

在第一方面，本发明提供了一种稳定的冷冻干燥制剂，其包含或由FGF-18、缓冲液、泊洛沙姆表面活性剂和作为稳定剂的糖组成。在一个优选的实施方案中，缓冲液是磷酸盐缓冲液，表面活性剂泊洛沙姆是泊洛沙姆188，稳定剂是蔗糖。在进一步优选的实施方案中，缓冲液的pH值保持在或约6至8，更尤其是在或约7.2。在进一步优选的实施方案中，泊洛沙姆表面活性剂的浓度是在或约0.1至0.4mg/小瓶。优选地，FGF-1 8选自：1)一种多肽，其包含或由成熟形式的人FG F-18组成，对应的序列包含或由SEQ ID NO:1的残基28(Glu)-残基207(Ala)组成，2)一种多肽，其包含或由截短形式的人FGF-18组成，对应的序列包含或由SEQ ID NO:1的残基28(Glu)-残基196(Lys)组成，和3)一种多肽，其包含或由SEQ ID NO:2组成。更优选地，FGF-18是trFGF-18，其定义见下文。