[发明专利]一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

（1）将混合菌粉加入初级培养液进行活化并混合培养，得混合菌液，再将混合菌液加入二级培养液中扩大培养至对数生长期，调节OD₆₀₀值，得待干燥混合菌液；

（2）将上述待干燥混合菌液放入离心机中离心，移去上清液，得到沉淀，将沉淀、水及冻干保护剂混合均匀，得菌悬液，将制得的菌悬液移入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得干燥物；

（3）将上述干燥物与干燥物质量4倍的蒸馏水，混匀后离心，移去上层清液，收集下层沉淀，并将下层沉淀干燥恒重后，冷却，得到复合菌剂的基体；

（4）将上述复合菌剂的基体添加发酵营养液进行发酵，发酵完成后，收集发酵物，将发酵物、混合微量元素添加剂、100目的蛭石混合均匀，静置，冷冻干燥，粉碎过筛，收集过筛颗粒，得水产养殖用复合微生物菌剂。

2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中混合菌粉中包括枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌，枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌的质量比为2：1：1，初级培养液配方按重量份数计，取牛肉膏1.2~2份、胰酪胨2.5~5份、马铃薯全粉8~10份、琼脂12~15份、葡萄糖1.5~2.5份、NaCl 3~5份、KH₂PO₄ 1.2~2.5份、吐温-80 0.6~1份、半胱胺酸 0.2~0.8份、水1000 份，pH值7.0 ± 0.2，121 ℃灭菌30min，得初级培养液。

3.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中扩大培养的条件：温度为30~35 ℃，培养时间18~24h；OD₆₀₀的调节值为1.5，若OD₆₀₀＞1.5，用二级培养液稀释至 OD₆₀₀=1.5；若OD₆₀₀＜1.5可先离心后移去部分上清液，再调整至 OD₆₀₀=1.5，二级培养液的配方按重量份数计，取胰酪胨12~17份、蛋白胨1~5份、牛肉膏0.2~0.5份、麦芽糖20~40份、葡萄糖10~15份、NaCl 1~3 份、琼脂15~20份、KH₂PO₄ 1.2~2.5份、MgSO₄·7H₂O 0.8~1.6份、维生素5~10份、水1000 份，pH值7.2 ± 0.1，121 ℃灭菌 20min，得二级培养液。

4.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中冻干保护剂是质量分数为40%甘油溶液，沉淀、水及冻干保护剂得质量比为1：6：4。

5.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中发酵营养液的配方按重量份数计，取麸皮10~15份，蛋白胨10~15份，小米粉16~20份，Na₂CO₃1.2~2份、MgSO₄·7H₂O 0.1~0.2份、FeSO₄·7H₂O 0.01~0.03份、NaCl 2~6份、水1000份，搅拌均匀，得发酵营养液；所述发酵条件为20~35℃，时间为18~24h。

6.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中发酵物、混合微量元素添加剂、100目的蛭石的质量比为2：1：6，微量元素添加剂的组份包括，按质量份数计，取FeSO₄·7H₂O 0.03~0.05份、ZnSO₄·7H₂O 0.01~0.05份、Na₂SeO₃ 0.03~0.09份、MgSO₄·7H₂O 0.05~0.2份、Ca(IO₃)₂ 0.02~0.09份。