[发明专利]野黄芩苷在降低烟气引起DNA损伤中的应用

说明书

技术领域

本发明属于卷烟研究领域，具体涉及一种有效降低烟气引起的DNA氧化损伤的中药物质。

背景技术

卷烟烟气粒相物中主要有害物质是苯并芘，酚类化合物，烟气烟碱，亚硝胺等。苯并芘等稠环芳烃是烟草有机物在高温乏氧条件下不完全燃烧的产物，经CYP1A活化成亲电子化合物，可攻击DNA，形成共价的DNA加合物，引起碱基错配或DNA断裂。DNA损伤与肿瘤和衰老相关疾病的发生、发展均有关联。

作为DNA损伤的生物标记，肿瘤抑制蛋白P53的活化和组氨酸γ-H2AX的磷酸化可作为各种化学物质遗传毒性筛选的指标，这一指标对DNA断裂的评价具有较好的敏感性和特异性。卷烟烟气在体外可产生大量的活性氧自由基ROS对DNA造成直接损伤，如DNA断裂或交联等。

中草药是我国的传统药物，在我国历经上千年的实践应用，具有安全，高效等特性，尤其是很多中草药中提取鉴定的很多小分子化合物在抗氧化、清除ROS保护机体免受伤害等方面具有重要作用。因此，我们从天然产物中获得的具有DNA损伤保护作用的化合物——野黄芩苷，以此来研究野黄芩苷的抗氧化作用，从而研发出具有降低烟气引起DNA损伤的化合物。

发明内容

本发明的目的是为了降低吸烟导致人体DNA氧化损伤的危害，提供一种野黄芩苷在降低烟气引起DNA损伤中的应用，可以有效降低烟气中苯并芘引起的DNA损伤。

本发明首先将10μM卷烟烟气中的稠环芳烃（苯并芘）与20μM野黄芩苷同时加入到p53^-/--p53-GFP MEF细胞中，此处理方法称为苯并芘与野黄芩苷共处理，处理24h后，用荧光显微镜在488nm的激发光进行检测，结果显示与DMSO对照组相比苯并芘激活GFP蛋白表达，表明苯并芘能够引起DNA损伤而激活p53，而苯并芘和野黄芩苷共处理后荧光表达明显减弱，提示野黄芩苷能够降低苯并芘引起的p53的激活。又通过Western Blot实验检测野黄芩苷在细胞水平对人胚肺成纤维细胞MRC-5中由苯并芘引起的DNA损伤的保护作用。结果表明，野黄芩苷对MRC-5细胞中苯并芘引起DNA损伤具有保护作用。

野黄芩苷在降低烟气引起DNA损伤中的应用具体如下：

已知一支卷烟燃烧大约产生10-100ng的苯并芘，根据实验结果换算，一支卷烟中加入36.6-366ng的野黄芩苷就能降低卷烟汇中苯并芘引起的DNA损伤。纳克级别的野黄芩苷就能明显降低一支卷烟中苯并芘引起的DNA损伤，一方面说明了野黄芩苷对DNA损伤的具有显著的保护作用，另一方面也避免了野黄芩苷可能带来的副作用。

本发明为野黄芩苷发掘了新的用途，将野黄芩苷用于卷烟中降低苯并芘引起的DNA损伤可以用量很少，避免了药物的副作用。为今后开发新的DNA损伤保护物质奠定基础。

附图说明

图1 分别为本发明中阴性对照1% DMSO处理p53^-/--p53-GFP MEF细胞的DIC和GFP荧光图（图A、B），10μM苯并芘处理p53^-/--p53-GFP MEF细胞的DIC和GFP荧光图（图C、D），10μM苯并芘与20μM野黄芩苷共同处理p53^-/--p53-GFP MEF细胞的DIC和GFP荧光图（图E、F）；

图2是10μM苯并芘与20μM野黄芩苷共同处理MRC-5细胞24小时后，MRC-5细胞中p53和γ-H2AX蛋白表达情况。

具体实施方式

下面通过对野黄芩苷实例的实施方式和附图对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容，实施例中方法如无特殊说明均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均为常规市售试剂或采用常规方法配置的试剂。

实施例1：

苯并芘激活p53^-/--p53-GFP MEF细胞中GFP荧光实验，具体实验操作如下：

（1）p53-GFP-报告载体的构建，具体方法如下：

1）采用BgLII 及NotI双酶切将绿色荧光蛋白GFP报告基因从pAcGFP1-N1质粒（购买于Clontech）上切下，替换掉pGL4.82（购买于Promega）中Luciferase 报告基因，制得pGL4 -GFP载体；