[发明专利]一种大肠杆菌工程菌发酵产L-苏氨酸培养基及其用途

说明书

本发明公开了一种优化的大肠杆菌工程菌发酵产L‑苏氨酸培养基，所述培养基包括种子培养基和发酵培养基，所述种子培养基包括葡萄糖、玉米浆和钴胺素；所述发酵培养基包括葡萄糖、玉米浆、钴胺素。

技术领域

本发明属于细菌发酵领域，具体涉及一种优化的大肠杆菌工程菌发酵产L-苏氨酸培养基。

背景技术

苏氨酸为一种重要的氨基酸，在饲养业、食品以及医药行业等方面都有着极其重要的用途。2005年苏氨酸全球产量达到7万吨，继谷氨酸、赖氨酸后成为年产量第三的氨基酸。我国的氨基酸发酵工业相对落后，工业化发酵生产苏氨酸的水平提高缓慢，每年都需进口苏氨酸类产品以满足市场需求，短期内国内市场供需矛盾无法根本解决。因此，开展L-苏氨酸生产菌的选育与发酵条件的研究，对提高苏氨酸的产率、缩短我国氨基酸发酵工业与国际水平的差距都具有一定的意义。

微生物发酵法生产苏氨酸是目前主要的工业生产方法，由于大肠杆菌(Escherichia coli)繁殖迅速、发酵温度高、生理生化基础研究比较深入等特征成为L-苏氨酸生产的最常用菌株。本领域中需要筛选L-苏氨酸生产的最佳种子培养基及培养条件和最佳发酵培养基。

发明内容

在第一方面，本发明提供了一种优化的大肠杆菌工程菌发酵产L-苏氨酸培养基，所述培养基包括种子培养基和发酵培养基，

所述种子培养基包括葡萄糖、玉米浆和钴胺素；

所述发酵培养基包括葡萄糖、玉米浆、钴胺素；

在所述种子培养基中，葡萄糖45-55g/L、玉米浆60g/L、钴胺素17μg/L；

在所述发酵培养基中，葡萄糖160g/L、玉米浆60g/L、钴胺素10μg/L。

在一个实施方案中，所述种子培养基中包括刃天青3mg/L和血红素18mg/L。

在一个实施方案中，所述发酵培养基中包括刃天青1mg/L、血红素10mg/L、对氨基苯甲酸30μg/L。

在一个实施方案中，所述种子培养基配比为：葡萄糖50g/L、(NH₄)₂SO₄ 3g/L、玉米浆60g/L、酵母膏0.9g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、碳酸钙13g/L、钴胺素17μg/L。

在一个实施方案中，所述种子培养基包括刃天青3mg/L、血红素18mg/L。

在一个实施方案中，所述发酵培养基配比为：葡萄糖160g/L、硫酸铵35g/L、玉米浆60g/L、KH₂PO₄ 0.2g/L、七水硫酸镁0.6g/L、生物素140μg/L、硫胺素100μg/L、蛋氨酸300μg/L、CaCO₃ 20g/L、钴胺素10μg/L。

在一个实施方案中，所述发酵培养基包括刃天青1mg/L、血红素10mg/L、对氨基苯甲酸30μg/L。

在第二方面，本发明还提供了本发明第一方面的培养基用于进行大肠杆菌工程菌发酵的用途。

本发明提供的种子培养基和发酵培养基，领域中需要筛选L-苏氨酸生产的最佳。

具体实施方式

实施例

实验菌株：菌种大肠杆菌工程菌K12△dapA，缺失二氢吡啶二羧酸合成酶(dapA)的编码基因，为产L-苏氨酸的赖氨酸缺陷型菌株。

试剂：生物素、硫胺素、L-蛋氨酸为上海生工产品。其他试剂均为国药分析纯试剂。