[发明专利]与糖肽反应的单克隆抗体及其用途

说明书

【技术领域】

本发明涉及与糖肽反应的单克隆抗体及其用途。

【背景技术】

当从肝炎－肝硬化向肝脏癌发展时、在生物体试样中与扁豆凝集素(LCA)结合的α-胎蛋白(AFP)(LCA结合性AFP)被报告增加。专利文献1记载了用于检测LCA结合性AFP的抗体。专利文献1的抗体被记载为，对于结合性AFP显示反应性，对于LCA非结合性AFP不显示反应性。

【现有技术文献】

【专利文献】

【专利文献1】日本特开昭63-307900号公报

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

专利文献1记载了LCA结合的AFP的糖链存在岩藻糖(Fucose)。与生物体试样中的扁豆凝集素结合的AFP的级分被称为AFP-L3级分。AFP-L3级分由岩藻糖基化AFP(向AFP的天冬酰胺残基附加核心岩藻糖(与N型糖链的还原末端的N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)α1-6结合的岩藻糖)的AFP)构成。

在专利文献1的实施例中取得了与LCA结合性AFP(AFP-LCA-R)结合、不与LCA非结合性AFP(AFP-LCA-NR)结合的抗体(参照实施例1、表1、图1)。但是，此抗体的表位不明。在实施例中，LCA结合性和非结合性，如上所述，被认为起因于岩藻糖的有无，与抗原的结合性有不依赖于肽部分的序列而依赖于岩藻糖部分的可能性。此时，不仅是AFP，有也非特异性地结合于有此外的岩藻糖的蛋白质的可能性。因此，期望以糖肽的岩藻糖部分和肽部分的氨基酸这两者作为表位的单克隆抗体的开发。

【解决课题的技术方案】

本发明提供单克隆抗体，其

与(a)所示的糖肽反应：

【化1】

不与(b)所示的糖肽反应：

【化2】

本发明提供国际保藏号是NITE BP-02349或NITE BP-02350的杂交瘤。

本发明提供使用上述抗体的岩藻糖基化AFP的测定方法。

本发明提供岩藻糖基化AFP检测用试剂盒，其含岩藻糖基化AFP的捕获用抗体、岩藻糖基化AFP的检测用抗体、固相，上述捕获用抗体或上述检测用抗体是上述抗体。

【发明效果】

本发明的抗体可将糖链部分和肽部分这两者用1种抗体并且以高的特异性识别。

【附图说明】

【图1】是显示使用抗体生产细胞的培养上清，以在表2中记载的阳性抗原(糖肽A)或阴性抗原(非岩藻糖基化糖肽A)作为抗原，进行抗原固相ELISA的结果的图。

【图2】是显示使用抗体生产细胞的培养上清，以重组体AFP-L3、非岩藻糖基化AFP、岩藻糖基化ALP作为抗原，进行抗原固相ELISA的结果的图。

【图3】是显示使用杂交瘤培养上清，以重组体AFP-L3、非岩藻糖基化AFP、岩藻糖基化ALP作为抗原，进行抗原固相ELISA的结果的图。

【图4】是显示在实施例1中得到的克隆S4-1F8及S4-4F9的蛋白印迹的结果的图(泳道1：岩藻糖基化AFP(AFP-L3/重组体)(阳性抗原)、泳道2：非岩藻糖基化AFP(人血清来源AFP(LEE biosolutions)的LCA凝集素非吸附级分)(阴性抗原)、泳道3：岩藻糖基化ALP(ORIENTAL酵母/47787055))(阴性抗原)。

【图5】是显示以阳性糖肽(Fuc+)、阴性糖肽(Fuc-)作为抗原，进行抗原固相ELISA的结果的图。

【图6】是显示S4-1F8的蛋白印迹的结果的图(泳道1：重组体AFP-L3、泳道2：非岩藻糖基化AFP、泳道3：天然人AFP(μTAS WAKO AFP-L3用校准物1)、泳道4：天然人AFP-L3(μTAS WAKO AFP-L3用校准物2))。

【实施方式】

本实施方式的抗体在使用利用本实施方式的抗体的生物体试样等的测定系统中发挥特异性即可。例如，即使与生物体试样中不含的物质非特异性地结合，如果也在通常使用本实施方式的抗体的环境中发挥特异性，则发挥本发明的作用效果。具体而言，在由ELISA对全血、血清、血浆等的血液试样中的物质进行检测时，在ELISA测定系统中显示特异性即可，也可与血液试样或ELISA试剂中通常不含的物质结合。

本实施方式的抗体是单克隆抗体，其

与(a)所示的糖肽(SEQ ID NO:13)反应：

【化3】

不与(b)所示的糖肽(SEQ ID NO:14)反应：

【化4】