[发明专利]一种低糖基化普鲁宁的制备及其在抗炎平喘药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种低糖基化普鲁宁的制备及其在抗炎平喘药物中的应用

技术背景

咳、痰、喘是呼吸系统疾病的常见症状，日常生活中尤常见于急、慢性支气管炎、感冒等所引起，临床是以咳嗽、咯痰伴有喘息及反复发作为特征，是由于感染或非感染因素引起的气管、支气管粘膜及周围组织的急、慢性非特异性炎症。属中医学的咳嗽、痰饮、哮喘范畴，是一种常见病、多发病。特别是中老年人由于环境因素和生活习惯的影响，容易产生咳嗽、咯痰等支气管炎症状，发病期间没有很好的进行治疗控制，而逐渐发展成为疾病的。支气管哮喘 (哮喘)是临床常见病和多发病，近年来发病率呈上升趋势。其发病机制尚未完全阐明。鉴于人体试验的局限性，目前对哮喘病因、发病机制及治疗等方面的研究很大程度上需要通过动物模型来进行，建立良好的支气管哮喘动物模型具有重要意义。

目前已上市的该类药物还是具有服药量多和服用不方便的特点，而且效果并不明显。因此有必要继续研制出服用安全、疗效可靠的平喘抗炎新药物。柚皮素是黄酮类化合物的苷元，是一种黄酮类物质，具有，抗菌，消炎，抗癌，解痉和利胆，治疗心血管疾病，降胆固醇等方面的作用。研究表明黄酮化合物在治疗平喘抗炎方面有很好的疗效，因此，制备溶解度高，效果好、服用方便的平喘抗炎的黄酮化合物是本发明的宗旨。本发明以小鼠和家兔为动物实验模型验证了低糖基化普鲁宁在抗炎平喘中的效果，经过试验验证低糖基化普鲁宁比传统的止抗炎平喘的效果更为显著。

黄酮化合物广泛存在于芸香科植物中，不同类型的黄酮类化合物在人体中的代谢途径和生物利用度不同，苷元型黄酮化合物易于人体的吸收和利用，可通过小肠壁直接吸收进入血液，而糖苷型的黄酮化合物需要在肠腔中微生物的作用下，通过降解和代谢途径转化为苷元型黄酮，才能被人体吸收和利用。因此，苷元型黄酮化合物具有更高的生物利用价值和营养价值。但苷元型黄酮一般在水中的溶解度低，不利于苷元黄酮的生物利用和发挥黄酮苷元的药效。因此，为增加苷元黄酮的溶解性，科研人员在溶剂中加入碱如：在溶液中加入 NaOH、KOH等，或者加入有机溶剂如：乙醇，二甲基亚砜等，大大提高苷元黄酮的溶解性，但是强碱和有机溶剂对人体有害，会限制苷元黄酮开发利用。

普鲁宁是单糖基化柚皮素，国内外的药理研究表明：普鲁宁具有杀菌、抗氧化、抗病毒、抗缺血、抗肿瘤、消炎、抗过敏等多种药理活性(Grzechulska J，ApplCatal B，2002，36(1):45－51；Daghrir R，Ind Eng Chem Res，2013，52 (10):3581－3599)。普鲁宁最初由南朝鲜民间药物山桃中提取得到的，其在自然界中主要分布于苏木科、蔷薇科、大戟科等植物中。其在自然界中含量少且提取率低，又因水溶性、脂溶性差，较难获得，价格昂贵。目前普鲁宁的制备方法主要有一下两种，化学合成法和酶法水解柚皮苷法。相对于化学法合成普鲁宁，反应条件苛刻、产物分离繁琐且对环境危害大的缺点；利用酶法(α-L- 鼠李糖苷酶切掉柚苷鼠李糖糖基后得到普鲁宁(胡群芳Modern Food Science and Technology 2015,Vol.31,No.1))水解柚苷制备普鲁宁的条件温和、转化率高、安全环保，因此研究酶法制备普鲁宁具有很高的应用价值。但是普鲁宁在水中溶性和脂溶性都极低(＜10mg/L)，这大大限制了普鲁宁的应用，使普鲁宁生物利用度较低。

本发明旨在提高普鲁宁的在水中的溶解度，来提高普鲁宁的生物利用度。因此，本发明通过2次酶法获得低糖基化普鲁宁溶解度是普鲁宁的75倍以上，药物制剂的半衰期也有明显的延长，低糖基化普鲁宁生物利用度提高10倍以上。具体实施方法如下：

一种低糖基化普鲁宁，其特征在于化学结构式如I所示：

其中

R₁＝H,

其中n ＝1～3；

R₂＝H或Rha；

低糖基化普鲁宁制备自高糖基化母体，其结构式如Ⅱ所示：

R₁＝H,

n＝ 4～10；

R₂＝H，Rha；

高糖基化普鲁宁制备自柚苷、柚皮素、普鲁宁等柑橘或者柚子提取物；在对普鲁宁高糖基化时，糖基化酶为UDP-糖基转移酶等得到高糖基化普鲁宁(糖基化程度为4-10个糖基)。高糖基普鲁宁用α-L-鼠李糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、木糖聚酶制备低糖基化普鲁宁(糖基化程度小于4个糖基)。