[发明专利]一种测定金霉素效价的方法

权利要求书

1.一种测定金霉素效价的方法，以蜡样芽孢杆菌为试验菌种，采用管碟法进行金霉素效价的测定，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)配制盐酸金霉素工作标准溶液

精密称定适量盐酸金霉素，分别配制浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.08μg/mL、0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液；

(2)绘制标准曲线，获得载距a、斜率b和相关系数r的取值

以浓度为0.04μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液分别作为浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.08μg/mL和0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液的参比溶液，采用管碟法进行试验，通过抑菌圈自动测量分析软件绘制标准曲线，获得所述标准曲线的载距a、斜率b和相关系数r的取值及参比溶液产生的抑菌圈直径或面积的总平均值Y_0p总；

所述管碟法具体为：针对除参比溶液外的其它四种浓度的盐酸金霉素工作标准溶液，以所述每种盐酸金霉素工作标准溶液进行管碟法试验时，至少设置三个铺有蜡样芽孢杆菌菌层培养基的培养皿，每个培养皿中间隔放置六枚钢管，交叉滴定参比溶液和该盐酸金霉素工作标准溶液，然后在30℃下培养16-18小时后，放入抑菌圈自动测量分析仪中进行测试；

(3)金霉素样品效价测定

精密称定适量金霉素样品，根据所述金霉素样品的估计效价配制金霉素浓度为0.04μg/mL的样品溶液，然后至少设置三个铺有蜡样芽孢杆菌菌层培养基的培养皿，每个培养皿中间隔放置六枚钢管，交叉滴定步骤(2)中的参比溶液和所述样品溶液，然后在30℃下培养16-18小时后，放入抑菌圈自动测量分析仪中进行测试，通过抑菌圈自动测量分析软件，获得参比溶液产生的抑菌圈直径或面积的平均值Y_0p及样品溶液产生的抑菌圈直径或面积的平均值Y_kp，通过以下公式计算金霉素样品效价：

金霉素样品效价＝C×稀释因子×10^-6×100％；

式中：C为试验过程中样品溶液中金霉素的实际浓度，计算公式为Y_kjz为校正直径或面积，计算公式为Y_kjz＝Y_0p总-Y_0p+Y_kp；稀释因子的计算公式为：稀释因子＝2.5×10⁷At，At为金霉素样品的估计效价。

2.根据权利要求1所述的一种测定金霉素效价的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述盐酸金霉素工作标准溶液的具体配制方法为：精密称定适量盐酸金霉素，溶于浓度为0.01mol/L的HCl溶液中，配制盐酸金霉素标准储备液；以所述盐酸金霉素标准储备液为母液，pH为4.5的浓度为0.1M的磷酸盐缓冲液为稀释剂，分别配制浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.08μg/mL、0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液。

3.根据权利要求1所述的一种测定金霉素效价的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述样品溶液的具体配制方法为：先将金霉素样品充分研磨，过100目筛，然后精密称定适量金霉素样品，加入萃取液中，密封，磁力搅拌或超声30分钟后调pH为≤1.2，经过滤后，以pH为4.5的浓度为0.1M的磷酸盐缓冲液为稀释剂，配制出金霉素浓度为0.04μg/mL的样品溶液。

4.根据权利要求3所述的一种测定金霉素效价的方法，其特征在于，所述萃取液为浓度为4mol/L的HCl、丙酮和纯化水按体积比1:13:6混合后形成的混合液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种测定金霉素效价的方法，其特征在于，所述管碟法中使用的培养皿规格为：Φ90×16-17mm；钢管规格为：内径为6.0±0.1mm，高为10.0±0.1mm。