[发明专利]多肽加热固相合成方法

权利要求书

1.一种多肽加热固相合成方法，包括如下步骤：

(1)加热缩合氨基酸：向反应器中加入多肽树脂，Fmoc保护的氨基酸、缩合剂和溶剂，加热至反应温度，反应时间为10-30min,反应结束后，在反应温度下用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂3次，每次洗脱时间为20-40s；

(2)加热脱除Fmoc：加入脱保护剂20％的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液，加热至反应温度，反应时间2-5min,反应结束后，在反应温度下用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂1次、氯仿洗涤树脂1次，按照上述洗涤顺序，重复洗涤树脂5-7次,每次30-40s；

(3)加热缩合氨基酸：将下一个Fmoc保护的氨基酸溶液、缩合剂和溶剂加入装有步骤(2)中脱除Fmoc的氨基酸树脂复合物的反应器中，加热至反应温度，反应时间为10-30min，反应结束后，用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂3次，每次洗脱时间为20-40s；

(4)加热脱除Fmoc：加入脱保护剂20％的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液，加热至反应温度，反应时间2-5min,反应结束后，在反应温度下用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂1次，然后用氯仿洗涤树脂1次，按照上述洗涤顺序，重复洗涤树脂5-7次,每次30-40s；

(5)按照氨基酸从羧基端到氨基端的顺序，更换氨基酸，重复加热缩合氨基酸和加热脱保护基的反应，合成需要的多肽；

(6)多肽粗品的制备：将步骤(5)洗涤后得到的保护肽-树脂进行切肽反应，将切肽反应得到的反应产物过滤，从滤液中分离得到粗品肽；

所述步骤(1)-步骤(4)的反应温度为恒温温度。

2.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于,步骤(1)-步骤(4)的反应温度为40-80℃。

3.如权利要求1或2所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于，所述反应温度为45-65℃，优选为：50-60℃。

4.如权利要求3所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于，所述反应温度为60℃。

5.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于,步骤(1)和(3)中所述缩合剂为DIC/HOBt、DIC/HOAt、DIEA/HBTU、DIEA/HATU或DIEA/TBTU。

6.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于,步骤(1)中的所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、氯仿、1,2-二氯乙烷。

7.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于,步骤(2)中所述的每次洗涤树脂的N,N-二甲基甲酰胺和氯仿的体积比为1:1。

8.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于,所述多肽树脂是氨基树脂、氯树脂Wang树脂或MBHA树脂。

9.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于，适用于含有6～40个氨基酸的多肽的合成。

10.如权利要求1所述的多肽加热固相合成方法，其特征在于，所述反应器为3通道反应器。