[发明专利]一种光皮桦组培苗高效增殖方法

权利要求书

1.一种光皮桦组培苗高效增殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

外植体无菌处理：枝条采集前采用1000～1500倍的甲基托布津溶液对其进行灭菌处理，采集灭菌后的枝条并剪除叶片，清洗去除表面附着物，经清洗浸泡、流水冲洗、化学试剂消毒处理后，用解剖刀裁剪成带有一个腋芽的小茎段作为外植体；

初代诱导培养：将步骤(1)处理后的外植体接种到初代诱导培养基中光照培养，培养温度为25℃～28℃，光照强度1000～1500Lux，光照时间10～12小时/天，培养25～30天后，获得不定芽；

初代诱导培养基的配方包括以下组分：3/4MS培养基、1.0～5.0mg/L的6-BA、0.01～0.05mg/L的NAA、40g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，用1mol/L的NaOH溶液调节所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0；

继代增殖培养：将步骤(2)获得的不定芽切取长度1.5～2.0cm接入继代培养基中进行增殖培养，培养温度为25℃～28℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间10～12小时/天，增殖培养25～30天后，获得丛生芽；

继代增殖培养基的配方包括以下组分：MS培养基、3.0～5.0mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/L的NAA、30～50g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，所述增殖培养基的pH值用1mol/L的NaOH溶液调至5.8～6.0；

壮苗培养：将步骤(3)获得的丛生芽切割分成1棵芽/丛，接种到壮苗培养基中培养，培养温度为25℃～28℃，光照强度2000～2500Lux，光照时间10～12小时/天，壮苗培养20～25天后，获得壮芽；

壮苗培养基的配方包括以下组分：3/4MS培养基、0.1mg/L的6-BA、0.01mg/L的NAA、40g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，所述壮苗培养基的pH值用1mol/L的NaOH溶液调为5.8～6.0；

生根培养：将步骤(4)得到的壮芽接种到生根培育基中，培养温度为25℃～28℃，光照强度2000～2500Lux，光照时间12～16小时/天，生根培养25～30天后，获得完整的光皮桦植株组培苗；

生根培养基的配方包括以下组分：1/3MS培养基、0.5～1.5mg/L的IBA、0.01～0.1mg/L的NAA、0.1～0.3mg/L的生根粉、20～40g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，所述生根培养基的pH值用1mol/L的NaOH溶液调为5.8～6.0。

2.如权利要求1所述的一种光皮桦组培苗高效增殖方法，其特征在于：步骤(1)中枝条选当年生抽稍的半木质化枝条作为组织培养外植体，所述半木质化枝条上具有饱满的腋芽。

3.如权利要求1所述的一种光皮桦组培苗高效增殖方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤为：将采集的枝条剪除叶片，用清水洗去表面附着物，再用软毛刷沾取洗衣粉轻轻刷洗，然后将枝条剪成5.0～6.0cm茎段放置在烧杯中，用1000～1500倍甲基托布津溶液浸泡5min后，先置于流水下冲洗20～30min，再用无菌水冲洗2遍后，放置于无菌容器中，转入超净台，用体积浓度为70％的乙醇浸泡外植体40s，无菌水冲洗1次后，再用质量浓度为0.1％氯化汞对外植体浸泡消毒4～12min，最后用无菌水冲洗外植体5次，每次1～2min，用解剖刀将茎段两端断面切掉0.5cm，然后将茎段裁剪为长1.5～2.0cm带有一个腋芽的小茎段作为外植体。