[发明专利]缺刻缘绿藻主要脂滴蛋白的基因序列及其应用

说明书

本发明涉及缺刻缘绿藻主要脂滴蛋白的基因序列及其应用。本发明从缺刻缘绿藻中获得了一种主要脂滴蛋白的基因序列，通过基因过表达实验发现该基因编码蛋白确实定位在酵母细胞的脂滴上，从而证实了该基因参与脂滴形成的功能，又通过薄层色谱分析进一步证实其具有提高酵母细胞积累或储存三酰甘油的能力。因此，本发明的缺刻缘绿藻主要脂滴蛋白及其基因序列可被应用于生物能源产业，以增加油脂产量。

技术领域

本发明涉及生物能源和植物生物技术领域，具体地说，涉及缺刻缘绿藻主要脂滴蛋白(major lipid droplet protein,MLDP)的基因序列及其应用。

背景技术

能源是人类社会发展的基础。目前全球正面临着能源危机，石油资源供应紧张，而可再生性使生物能源的开发越来越受到社会的关注。微藻生物柴油以其不与人争粮、不与粮争地、不与畜争料的独特优势吸引了越来越多科研工作者的关注。为了提高各种油料作物的产油量，脂滴以及脂滴结合蛋白(protein associated lipid droplet)逐渐成为植物生物技术的研究目标。不同种类的微藻积累脂滴的能力不同，其中绿藻、硅藻等真核微藻的油脂含量比较高，有希望成为生物柴油的生产藻种。本实验室研究的缺刻缘绿藻(Myrmeciaincisa Reisigl H4301)是一种淡水单细胞微藻，隶属绿藻门(Chlorophyta)。该藻能大量积累三酰甘油(TAG)，尤其是在缺氮条件下，这些TAG包裹在半单位膜内以脂滴的形式存在于细胞中，是潜在的微藻生物柴油藻种。

细胞的脂滴(lipid droplet,LD)也称油体(oil body,OB)或脂质体(lipid body,LB)，它们将为细胞的未来生长提供所贮存的碳源和能量。脂滴是细胞内中性脂贮存的主要场所，由极性单磷脂层包裹疏水核心组成。近年来的蛋白质组学研究表明，脂滴表面还存在着许多功能蛋白，进一步揭示了脂滴可能参与细胞内物质的代谢和转运，以及细胞信号传导等过程，是一个活动旺盛的多功能细胞器。

专利文献CN103965306A，公开日2014.08.06，公开了一种产油酵母脂滴蛋白及其编码基因与应用。发明人通过脂滴蛋白质组学研究，鉴定到产油酵母粘红酵母(Rhodotorula glutinis)油脂积累期间一种新颖的周脂素样蛋白高丰度表达，并发现该蛋白的丰度与油脂含量成正比，将其命名为RgLDP1(R.glutinis lipid droplet protein 1，粘红酵母脂滴蛋白1)，绿色荧光蛋白共定位和油脂发酵分析证明该基因与产油微生物油脂积累、贮运和代谢调控密切相关，能显著提高细胞油脂积累和贮存量。

然而，目前还未见能显著提高合成TAG功能的缺刻缘绿藻主要脂滴蛋白的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种缺刻缘绿藻主要脂滴蛋白的基因序列及其应用。

第一方面，本发明提供了一种多肽，所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。

第二方面，本发明提供了一种分离的核苷酸序列，所述的核苷酸序列包括：

a)SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列；或

b)与a)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

第三方面，本发明提供了一种重组表达载体，所述的重组表达载体是由如上所述的核苷酸序列与质粒或病毒所构建的重组表达载体。

作为一个优选例，所述的质粒是pYES2质粒。

第四方面，本发明提供了一种基因工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞选自于下列中的一种：

a)用如上所述的核苷酸序列转化或转导的宿主细胞；

b)用如上所述的重组表达载体转化或转导的宿主细胞。