[发明专利]一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法

权利要求书

1.一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法，其特征在于包括以下具体步骤：

（1）、取新鲜的哺乳动物食道清洗干净，剥离肌肉层，留下粘膜和粘膜下层；

（2）、将粘膜和粘膜下层置于体积浓度为75～95%的酒精中漂洗3～10分钟，然后用清水洗去酒精；

（3）、将粘膜和粘膜下层置于质量浓度为1～5%的曲拉通100中浸洗1～5天，期间每12小时换液一次，最后用PBS清洗；

（4）、将粘膜和粘膜下层浸入温度为30～40℃的胰脂酶/PBS溶液中5～20小时，其中：胰脂酶在溶液中的浓度为1000～5000Ｕ/L，然后取出在体积浓度为75～95%的酒精中漂洗，再用PBS漂洗；

（5）、将粘膜和粘膜下层浸入温度为30～40℃的DNA酶/PBS溶液中浸泡2～10小时，其中：DNA酶在溶液中的浓度为1000～5000U/L，然后取出用PBS漂洗；

（6）、将粘膜和粘膜下层在体积浓度为75～95%的酒精中浸泡1～5小时，然后取出用PBS漂洗，并冻干保存；

（7）、取新鲜的胎盘羊膜除去血块和绒毛膜，留下包含上皮细胞层、基底膜和无血管基质的完整羊膜组织，并用PBS清洗，得到干净半透明的羊膜；

（8）、用体积浓度为75%的酒精将半透明羊膜漂洗1～2次，再用PBS漂洗2～4次，然后将由青霉素和链霉素组成的双抗混合到PBS中形成双抗/PBS溶液，其中：青霉素和链霉素在双抗/PBS溶液中的含量均为100～500U/L，再将半透明羊膜按体积比为1：1～3置于双抗/PBS溶液中浸泡震荡，每12小时换液一次，共两次；

（9）、将青霉素、链霉素、曲拉通100混合到PBS中形成综合PBS溶液，其中：青霉素和链霉素在综合PBS溶液中的含量均为100～500U/L，曲拉通100在综合PBS溶液中的重量比为1～5%，再将半透明羊膜按体积比为1：1～3的比例置于综合PBS溶液中浸泡震荡，每6～8小时换液一次，共两次，然后将半透明羊膜取出，用PBS漂洗1～2次；

（10）、将半透明羊膜按1：1～3的体积比浸泡在胰脂酶/PBS溶液中，其中：胰脂酶在胰脂酶/PBS溶液中的含量为500～5000U/L，并在溶液温度为30～40℃下处理5～20小时，然后将半透明羊膜取出用PBS漂洗1～2次，再将半透明羊膜按1：1～3的体积比浸泡在DNA酶/PBS溶液中，其中：DNA酶在DNA酶/PBS溶液中的含量为1000～5000U/L，并在溶液温度为30～40℃下处理2～5小时；

（11）、将半透明羊膜从DNA酶/PBS溶液中取出，置于双抗/PBS溶液中震荡漂洗，其中：青霉素和链霉素在双抗/PBS溶液中的含量均为100～500U/L，每12小时换液一次，共两次，得到脱细胞羊膜，并将脱细胞羊膜放到PBS中，在4℃的温度下保存待用；

（12）、将脱细胞羊膜平铺在步骤（6）制备得到的冻干食道粘膜上，室温下晾干，得到具有生物学结构和功能的人工食道。

2.如权利要求1所述的一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法，其特征在于：所述的PBS的pH值为7.4。

3.如权利要求1所述的一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法，其特征在于：所述的哺乳动物食道为猪食道、狗食道、猴食道、兔食道或羊食道。

4.如权利要求1所述的一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法，其特征在于：所述的胎盘羊膜为人胎盘羊膜或动物胎盘羊膜。