[发明专利]一株分泌抗奥美普林单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS20及其应用

说明书

一株分泌抗奥美普林单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS20及其应用，属于免疫化学技术领域。本发明通过常规的细胞融合技术制备了一株鼠源的单克隆细胞株SS20，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14685。该细胞株分泌的单克隆抗体采用间接竞争酶联免疫法测定，对奥美普林的IC₅₀为48.95μg/L。对牛奶和蜂蜜中奥美普林的回收率范围分别为：85.96%～108.21%及88.12%～112.54%。为食品中奥美普林残留的检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株鼠源的杂交瘤细胞株SS20及其分泌的能识别奥美普林的单克隆抗体，可用于食品中奥美普林残留的检测，属于免疫化学技术领域。

背景技术

奥美普林是一种磺胺抗菌增效剂，在分类上属于二氨基嘧啶类化学合成抗菌药，广泛用于畜牧和水产养殖业。其对球虫病有显著的抗菌活性。奥美普林不仅对磺胺类抗生素的抗菌活性有增强作用，对氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类抗生素的抗菌活性也有增强作用。

在中国，增效剂也可以单独用来治疗动物感染的疾病。这类药物通常被当作饲料添加剂使用，并且由于这些药物的物理和化学性质都比较稳定，所以导致了这些药物在养殖业中的滥用。如果动物没过休药期就被宰杀，这些药物就会通过食物链在人体内富集，从而导致耐药菌的出现。目前国内外对于奥美普林在动物性食品中残留量的限量标准还没有相关规定。但是对于畜牧业和水产养殖业中奥美普林使用的监管，以及对动物性食品中奥美普林的残留量检测并进行监督十分重要。

目前，报道的对于奥美普林的检测仅有高效液相色谱法。这种方法的检测灵敏度好，特异性好。但是该方法有很多缺点：需要昂贵的仪器设备、样本前处理麻烦、检测时间长等等。酶联免疫分析方法（ELISA）是一种基于单克隆抗体的快速并且灵敏的高通量检测方法，对于食品中的药物残留检测具有重要意义。目前没有关于抗奥美普林单克隆抗体的报道。

发明内容

本发明的目的是开发针对奥美普林的单克隆抗体，并在此基础上建立ELISA方法。此发明内容包括两个方面：单克隆抗体的制备和其应用。

抗奥美普林单克隆抗体是通过给小鼠免疫奥美普林免疫原获得。免疫原和包被原都是通过戊二醛方法合成。第五次免疫后，筛选血清阳性高抑制好的小鼠取脾脏，将脾细胞与Sp2/0瘤细胞融合。融合后用间接ELISA方法检测细胞上清，筛选阳性高且对奥美普林抑制好的细胞进行亚克隆，进行三次亚克隆后获得纯的细胞株。将细胞株扩大培养后注射进打过石蜡油的小鼠的腹腔内制备腹水，获得的腹水用辛酸-硫酸铵方法进行纯化。测定单克隆抗体对奥美普林的半数抑制浓度(IC₅₀),以及对其结构类似物的IC₅₀, 计算交叉反应率。将奥美普林药物添加入牛奶中，进行样本添加回收实验，计算回收率。

本发明的技术方案：一株分泌抗奥美普林单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS20,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14685。

抗奥美普林单克隆抗体，由所述保藏编号为CGMCC No.14685的杂交瘤细胞SS20分泌产生，其IC₅₀为48.95 μg/L。

所述的抗奥美普林单克隆抗体的应用，用于对食品中奥美普林的残留检测。

对牛奶和蜂蜜中奥美普林的残留检测。

本发明的有益效果：采用间接竞争ELISA测定细胞株SS20分泌的单克隆抗体，对奥美普林的其IC₅₀为48.95 μg/L。对牛奶和蜂蜜中奥美普林的回收率范围为85.96%～108.21%和88.12%～112.54%。为动物性食品中奥美普林残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。