[发明专利]一株分泌抗二甲氧苄啶单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS0716及其应用

说明书

一株分泌抗二甲氧苄啶单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS0716及其应用，属于免疫化学技术领域。本发明通过常规的细胞融合技术制备了一株鼠源的单克隆细胞株SS0716，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14686。该细胞株分泌的单克隆抗体采用间接竞争酶联免疫法测定，对二甲氧苄啶的IC₅₀为0.58μg/L。对牛奶中及蜂蜜中二甲氧苄啶的回收率范围分别为：98.71%～104.01%及94.07%～98.68%。为食品中二甲氧苄啶残留的检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株鼠源的杂交瘤细胞株SS0716及其分泌的能识别二甲氧苄啶的单克隆抗体，可用于食品中二甲氧苄啶残留的检测，属于免疫化学技术领域。

背景技术

二甲氧苄啶是一种常用的磺胺抗菌增效剂，在分类上属于二氨基嘧啶类化学合成抗菌药，并且是动物专用。早期研究发现该药物与磺胺类抗生素合用可使磺胺类药物抗菌谱扩大、抗菌活性大大增强，甚至使磺胺类抗生素的抑菌作用变成杀菌作用，所以被成为“磺胺增效剂”。二甲氧苄啶本身具有抗菌活性，临床上主要是与磺胺类药物复配用于治疗畜禽的胃肠道、呼吸道、尿道等细菌感染及球虫感染，近年来，有研究表明该化合物还可以增强多种抗生素类药物和多种中药的疗效。但是该药物的长期使用，甚至是乱用、滥用，会造成动物性食品中的药物残留。同时也会导致部分细菌耐药性的出现。目前，仅有日本规定二甲氧苄啶在鸡可食性组织（肌肉、肝脏、肾脏和脂肪）中的最高残留量为50μg/kg，其它各国及国际组织均未对二甲氧苄啶制定食品安全标准。对于动物养殖业中二甲氧苄啶使用的监管，以及对动物性食品中二甲氧苄啶的残留检测并进行监督十分重要。

目前，对于二甲氧苄啶的检测方法主要是依靠仪器分析，例如液相色谱等。但是这些方法需要依靠昂贵的仪器设备，检测时间长，需要专业的人员来操作。酶联免疫分析方法（ELISA）是一种基于单克隆抗体的快速并且灵敏的高通量检测方法，对于食品中的药物残留检测具有重要意义。目前没有关于抗二甲氧苄啶单克隆抗体的报道。

发明内容

本发明的目的是开发针对二甲氧苄啶的单克隆抗体，并在此基础上建立ELISA方法。此发明内容包括两个方面：单克隆抗体的制备和其应用。

抗二甲氧苄啶单克隆抗体是通过小鼠免疫二甲氧苄啶免疫原获得。免疫原和包被原都是通过戊二醛方法合成。第五次免疫后，筛选血清阳性高抑制好的小鼠取脾脏，将脾细胞与Sp2/0瘤细胞融合。融合后用间接ELISA方法检测细胞上清，筛选对阳性高且对二甲氧苄啶抑制好的细胞进行亚克隆，进行三次亚克隆后获得纯的细胞株。将细胞株扩大培养后注射进打过石蜡油的小鼠的腹腔内制备腹水，获得的腹水用辛酸-硫酸铵方法进行纯化。测定单克隆抗体对二甲氧苄啶的半数抑制浓度(IC₅₀)，以及对其结构类似物的IC₅₀，计算交叉反应率。将二甲氧苄啶药物添加入牛奶中，进行样本添加回收实验，计算回收率。

本发明的技术方案：一株分泌抗二甲氧苄啶单克隆抗体的杂交瘤细胞株SS0716，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14686。

抗二甲氧苄啶单克隆抗体，由所述保藏编号为CGMCC No.14686的杂交瘤细胞SS0716分泌产生，其IC₅₀为0.58 μg/L。

所述的抗二甲氧苄啶单克隆抗体的应用，用于对食品中二甲氧苄啶残留的检测。

本发明的有益效果：采用间接竞争ELISA测定细胞株SS0716分泌的单克隆抗体，对二甲氧苄啶的IC₅₀为0.58 μg/L。对牛奶及蜂蜜中二甲氧苄啶的回收率范围为98.71%～104.01%及94.07%～98.68%。为动物性食品中二甲氧苄啶残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。