[发明专利]一种口腔拭子保存液及其制备方法和应用

说明书

一种口腔拭子保存液，包括如下组分和含量：Tris‑HCl 5‑50mmol/L，EDTA 1‑10mmol/L，氯化钠50‑500mmol/L，SDS 0.1‑3%（w/v），体系pH范围在7‑10之间。所述口腔拭子保存液成分明确，制备方法简单，成本低廉，稳定性好，安全性高，无毒副作用，操作容易实现，便于细胞的保存和运输，适应大规模采样使用，应用前景广阔。其用于保存人体口腔拭子样本，可在15‑25℃的温度范围内（室温）长期保存，能有效的保护口腔上皮细胞中的基因组在数周内不被破坏，DNA完整性好，且口腔拭子样本不被微生物污染。

技术领域

本发明涉及细胞保存技术领域，具体涉及一种口腔拭子保存液及其制备方法和应用。

背景技术

DNA的提取是分子生物学检验工作中最基本的应用技术，传统上大多使用人全血作为基因提取的标本，采样过程存在一定困难，如抽血对人体的损害性，采血过程中的安全隐患，血液样本易遭污染，患者拒绝率较高等问题，同时采取血样的成本高，操作较为繁琐，需要具有专业技能的人员进行操作才可靠。因此，探索更为取材简便、操作便捷，同时易于被患者接收的基因采集方法具有非常重要的意义。

口腔黏膜上皮细胞的采集十分简便快捷，不仅方便易得，而且基本上无创，患者自行操作即可完成。现有技术中，许多医学领域中人体细胞提取的过程已适用提取口腔细胞进行分析，研究表明，口腔上皮细胞中提取到的DNA数量与质量比较理想，可作为人体细胞分析的样本进行使用。

口腔拭子是用专用的取样棉签在颊粘膜两侧轻刮数次，使采样拭头各处都蘸取口腔黏膜脱落的细胞，然后将拭子头置入细胞保存液中，让拭子头上留存的患者细胞落入口腔拭子保存液中，然后将含有患者细胞的拭子保存液密封，最后送到各分析中心。该采样方式是一种简单、无痛、无创的DNA标本采集方法。该方法适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。在家即可自行完成采样。口腔黏膜脱落细胞主要由口腔上皮细胞、腺体细胞和人体白细胞组成。这些脱落口腔细胞虽然会细胞核固缩，但同样具有完整的人类基因组DNA序列。因此口腔拭子或唾液可以代替血液成为基因组DNA的简易来源。

口腔拭子样本采集相对于血液样本采集来讲，对个体无创伤且无痛、操作简便、便于大量采样。此外，室温条件下保存时间较长的口腔拭子样本仍然可以提取得到完整的基因组DNA。并且当大范围收集样本时，口腔拭子样本适合在各地区的实验室和收集点之间传递。

口腔拭子采集到的样本中，除脱落的上皮细胞外，口腔中还有细菌及DNA酶、RNA酶，唾液中还有大量人体分泌的体液，包含粘蛋白、球蛋白、消化酶和白蛋白等物质，多种有机物的存在容易滋生大量微生物，细菌在25℃及以上的温度环境中，繁殖迅速，导致保存液pH值的下降。酸性的保存液环境加速上皮细胞的破裂，DNA释放出来。在DNA酶的分解下，DNA迅速降解。如何避免微生物生长的同时保证脱落细胞中基因组DNA的完整，成为口腔拭子保存液的关键所在。

已有专利都是唾液保存液，与口腔拭子保存液原理一致，其保护剂成分复杂，如专利公布号CN102440234B和CN102919218B。其中CN102919218B中含有氯化镁，镁离子是核酸酶激活剂，容易引起DNA的降解，不利于DNA的稳定性和完整性的保存；CN102440234B中含有蛋白质变性剂如异硫氰酸胍，可以抑制核酸酶的活性，但同时也裂解了细胞，使得DNA处于游离状态，不利于DNA的完整性保存。CN102919218B和CN105039306A中分别含有蔗糖和葡萄糖成分，虽然可以很好地保持该唾液保存固定液的粘度并维持细胞渗透压，但是容易引起细菌等微生物的滋生；CN105368812A中成分复杂，尿素、乙醇等成分虽然可以将唾液中的粘蛋白和球蛋白等有机物质进行变性处理，但同时也会对细胞造成裂解，不利于DNA的完整性保存，而且在该申请文件中提供的这些成分均为必须成分，即所有成分缺一不可才能保持DNA的稳定性。