[发明专利]一种可用于胶原分型的生物材料制备方法

权利要求书

1.一种可用于胶原分型的生物材料制备方法，制备的肽段可用于胶原分型、电泳和架桥分析，也可用于生物材料的制备，其特征在于制备过程包括下列各步骤：

(1)取市售或自制胶原溶于1～50ml的50～80％(v/v)乙酸溶液中，通氨气5～20min除氧；

(2)加入CNBr固体10～80mg或浓度为90～99％(w/v)CNBr的乙酸溶液(所用乙酸浓度与上步骤一致)，再次通氨气1～5min；

(3)密封容器中搅拌反应2～40小时，控制反应温度为4～35。℃，反应完成后，加入2～15倍的去离子水稀释并冻干；

(4)冻干样品再加2～15倍的去离子水稀释并冻干，可如此反复多次，直至过量反应物和副产物脱除干净；

(5)样品分离：使用市售翔丙基甲基纤维素或纤维素乙醇层析填料，起始缓冲液为0.01～0.05mol/L柠檬酸钠(PH2.0～4.5)缓冲液，洗脱缓冲液为0.10～0.33mol/L柠檬酸钠(PH2.0～4.5)缓冲液，柱清洗缓冲液为0.01～0.5mol/L NaOH缓冲液；

(6)填柱温度为35～50℃，填柱缓冲液为柱清洗缓冲液，柱平衡用起始缓冲液进行，直至PH值达到2.0～4.5；

(7)将冷冻干燥样品10～100mg溶解于2～200ml起始缓冲液中，30～50℃条件下加热处理8～20min后上柱，起始缓冲液与洗脱缓冲液梯度洗脱；

(8)以226nm测定吸光度，分别收集峰I、峰II、峰III，冻干即为三个肽段。