[发明专利]一种山兰无性快繁技术

说明书

技术领域

本发明属于植物体繁殖领域，具体涉及的山兰植物的离体无性快速繁殖内容。

背景技术

山兰Oreorchas patens (Lindl.) Lindl.为兰科山兰属多年生阴生草本植物，广泛分布于我国东北、西北、西南、华中等地，以干燥假鳞茎入药，药性属寒，味辛、甘，有小毒，具有解毒行瘀，杀虫消痈，滋阴清肺、化痰止咳等功效，据《中药大辞典》记载，山兰亦作山慈菇入药。山慈菇是一种常用的中药材，据《中华人民共和国药典》记载：山慈菇原植物有3种，分别为兰科植物杜鹃兰[Cremastra appendiculata （D.Don） Makino]、独蒜兰[Pleione bulbocodioides （Franch.） Rolfe]或云南独蒜兰（P. yunnanensis Rolfe），以其干燥假鳞茎入药，上述3种植物在吉林省均无分布。目前，山慈菇主要来源于野生品，因为其原植物（包括山兰）均为兰科不同属的植物，都具有兰科植物不易繁殖的共性问题，随着近年山慈菇的抗癌活性被发现，其需求量不断增加，因为原产地的山慈菇已经难以满足供应，从2008年起人们开始大量从长白山区采挖山兰作山慈菇入药，导致长白山区的山兰野生资源储量急剧下降，成为较珍稀的植物，因此，为保护这一植物的种质资源，保证山兰的可持续开发利用，开展其无性快繁技术研究已经迫在眉睫。由于这一植物开发的时间短，各方面的研究报道极少，尤其是其繁殖技术，包括无性快繁技术尚未有人发布。

发明内容

本发明的目的是提供一种山兰的无性快繁技术，用于进行山兰的繁殖，克服山兰繁殖困难的问题，为山兰种植提供大量的种苗。

本发明的山兰的无性快繁技术包括以下步骤：

1、愈伤组织最佳诱导培养基配方：MS +2.4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L。

2、取山兰假鳞茎在流水下冲洗并用毛刷轻轻刷净泥土，流水冲洗40min。然后在超净工作台上，用灭菌后的手术刀将假鳞茎外表皮轻轻剥离，用70%乙醇消毒0.5min，0.1%HgCl₂溶液消毒10min，无菌水洗5～6次，无菌滤纸吸干水分。切成0.5cm左右见方的小块，接种于MS培养基上，培养基均含3.0%蔗糖，0.8%琼脂，pH6.0，激素配方见步骤1。

3、每瓶接种3～5块。

4、在（25土1）℃恒温培养箱内培养，光照强度2000lx，光照12h/d。培养时间30～60d。

5、旺盛生长的愈伤组织在无性快繁培养基上生长30～60d可诱导生根及长叶。

6、最佳无性快繁培养基配方：MS+NAA1.0mg/L+6-BA 1.0mg /L。

本发明方法的有益效果是：在实验室内，通过少量的山兰假鳞茎就可获得大量的无性繁殖试管苗，诱导率可达90%以上。

具体实施方式

实施例1

1、取山兰假鳞茎在流水下冲洗并用毛刷轻轻刷净泥土，流水冲洗40min。然后在超净工作台上，用灭菌后的手术刀将假鳞茎外表皮轻轻剥离，用70%乙醇消毒0.5min，0.1%HgCl₂溶液消毒10min，无菌水洗5～6次，无菌滤纸吸干水分。切成0.5cm左右见方的小块，接种于MS培养基上，培养基均含3.0%蔗糖，0.8%琼脂，pH6.0。

2、愈伤组织最佳诱导培养基配方：MS +2.4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L。

3、每瓶接种3～5块。

4、在（25土1）℃恒温培养箱内培养，光照强度2000lx，光照12h/d。培养时间30～60d。

5、旺盛生长的愈伤组织在无性快繁培养基上生长30～60d可诱导生根及长叶。得本发明产品——山兰再生植株。

6、最佳无性快繁培养基配方：MS+NAA1.0mg/L+6-BA 1.0mg /L。

实施例2

1、取山兰叶片在流水下冲洗10min，然后在超净工作台上，用70%乙醇消毒0.5min，0.1%HgCl₂溶液消毒5min，无菌水洗3～4次，无菌滤纸吸干水分。切成0.5cm左右见方的小片，接种于MS培养基上，培养基均含3.0%蔗糖，0.8%琼脂，pH6.0。

2、愈伤组织最佳诱导培养基配方：MS +2.4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L。

3、每瓶接种3～5片。