[发明专利]用于荧光原位杂交的变性杂交盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种变性杂交盒及其使用方法,尤其指一种用于荧光原位杂交技术的变性杂交盒及其使用方法，属于生物技术领域。

背景技术

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术。FISH的原理是：根据核酸碱基互补配对原理，用半抗原标记DNA或者RNA探针与经过变性的单链核酸序列互补配对，通过带有荧光基团的抗体去识别半抗原进行检测，或者用荧光基团对探针进行直接标记并与目标序列结合，最后利用荧光显微镜直接观察目标序列在细胞核、染色体或切片组织中的分布情况。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。

FISH技术主要包括以下几个步骤：（1）样本玻片的制备；（2）样本玻片的预处理；（3）探针与样本的变性和杂交；（4）玻片洗涤；（5）结果观察。在FISH检测的整个过程中，探针与样本的变性和杂交是实验最关键的步骤，对检测结果的成功与否起了决定性的作用。

为了完成FISH的杂交试验，很多实验室通常选择荧光原位杂交仪。一般的原位杂交仪包括变性/杂交、杂交和固定温度等几个操作模式，价格为5～10万元人民币。这些杂交仪在进行FISH试验时，使用成本很高。而且一台荧光原位杂交仪最大能检测12个样本，当样本量过多时需要配置更多的荧光原位杂交仪或调整实验步骤，极大地增加了实验室的负担。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种用于荧光原位杂交的变性杂交盒及其使用方法，替代目前昂贵的荧光原位杂交仪，方便快捷地实现FISH实验中的变性和杂交操作，同时还能实现大量样本的批量检测，极大地降低了FISH检测的成本。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于荧光原位杂交的变性杂交盒，包括盒盖和盒体，盒体内设置可拆卸的玻片限位架，所述玻片限位架包括一个横向限位板及若干个与横向限位板呈十字交叉的竖向限位板。

作为优选，横向限位板与竖向限位板通过凹槽形成可拆卸式连接。如此，根据玻片的宽度和个数，可以自由调整竖向限位板的间距和个数，以实现玻片的位置限定，防止玻片在盒体内滑动，同时对不同的玻片进行隔离，避免样品间污染。

更进一步地，竖向限位板的边缘距离盒体内壁的最短距离为0.5-1.5cm。即竖向限位板的边缘并没有像横向限位板那样，与盒体内壁接触，而是有0.5-1.5cm的距离，方便玻片的取放。

作为优选，在盒盖内表面的四周设置若干个湿条固定夹。湿条固定夹可以通过固定不同数量和规格大小的湿条，以实现玻片在变性和杂交过程中的不同湿度要求。为实现更大的湿度范围，以及为玻片提供更均匀的湿度环境，在盒体内部的四周设置湿条限位卡槽。

作为优选，在盒盖外部上表面的四周设置凹陷围槽，盒体外部的下表面的四周设置与凹陷围槽相互配合的凸起围槽。凹陷围槽与凸起围槽相互配合，使得两个及以上的变性杂交盒形成稳固重叠。方便同时转移多个杂交变性盒。

作为优选，盒体的外部两侧设置把手，方便操作人员取放变性杂交盒。

作为优选，盒盖外部上表面的中央设置把手，方便盒盖的打开与关闭。为了方便多个变性杂交盒重叠，在盒盖上设置一个可以收纳把手的凹槽。

作为优选，在盒体内部的底面设置温度感应器，对盒体底部的温度进行计量，以保证与盒体底部接触的玻片的杂交变性温度。

一种上面所述的变性杂交盒的使用方法，包括以下步骤：

（1）湿条放置：根据实验的湿度要求，用盒盖内的湿条固定夹和盒体内的湿条限位卡槽固定相应数量的湿条；

（2）玻片放置：将封片完成的玻片放置在变性杂交盒盒体内部的底面，并通过玻片限位架对玻片进行位置限定和隔离；

（3）变性：将放置有玻片的变性杂交盒转移到恒温加热装置中进行变性；

（4）杂交：将变性完成的变性杂交盒转移到恒温加热装置中进行杂交；杂交完成后，将玻片从变性杂交盒中取出，即完成荧光原位杂交实验的变性杂交过程。

作为优选，步骤（3）中所述的恒温加热装置为水浴锅，所述的变性温度为70-80℃，变性时间为3-10分钟。

作为优选，步骤（4）中所述的恒温加热装置为恒温培养箱，所述的杂交温度为37-48℃，杂交时间为12-16h。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果 ：