[发明专利]用于脑中风的发光ELISA体外诊断试剂盒

说明书

本发明提供一种用于发光ELISA的体液样品稳定化用水溶液以及包含该水溶液的用于脑中风的发光ELISA体外诊断试剂盒，所述体液样品中含有神经损伤标志性蛋白成分，在该体液样品稳定化用水溶液中，溶质包括人血清、动物血清白蛋白、无机碱金属盐、Tris碱、蛋白变性剂以及非离子型表面活性剂，该水溶液的pH值为6.7～7.6。在使用ELISA法从体液样品(例如，外周血液)中检测神经细胞损伤标志性蛋白成分NF‑H时，本发明体外诊断试剂盒的准确性和可重复性高，可以将体液中pg级别的NF‑H稳定而准确地检测出来，从而可以对脑中风患者的患病程度、治疗效果、预后等进行诊断。

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，具体地说，涉及一种针对脑卒中(脑中风)患者的体液样品稳定化用水溶液、体外检测试剂盒、以及检测系统。

背景技术

脑卒中俗称中风，由脑血管阻塞或破裂导致的脑损伤引起，危害十分严重。流行病学研究发现，当今我国中风的致残率排名第一，病死率排名第二，仅次于癌症。没有哪种疾病能够像中风一样，瞬间令人口眼歪斜、四肢麻木、瘫痪在床，让人失去生活尊严。目前，我国每年新增中风病例超过370万，存活的脑卒中患者近2000万人，且患者数量处于急速上升期。高血压、糖尿病、心脏病都是脑中风的危险因素，中老年人是中风高危人群。因此，需要建立快速而准确的诊断脑卒中的方法。

当今脑中风的诊断方法以影像学为主，精确度低、费用高昂，给社会卫生事业带来重大负担。加之中风患者病情变化迅速、个体差异明显，给诊断与治疗带来巨大困难。

除影像学诊断外，在诊断脑中风的方法中，还有一种利用ELISA检测脑脊液中神经丝蛋白(neurofilament protein，NFP)含量的方法。神经丝蛋白(NFP)是中枢神经系统含量最高的蛋白之一，是构建神经丝-神经细胞相互通信联络的通道的主要成分。神经丝蛋白由三种特定的蛋白亚基(NF-L，NF-M，NF-H)组装而成。急性缺血性脑卒中直接造成大量的神经细胞死亡，而死亡的神经细胞则分解并释放出大量的结构蛋白，其中包括NF-H。因血脑屏障的原因，NF-H大都滞留在脑脊液。要检测脑脊液中的NF-H，通常采用脊髓穿刺的方法。但是，该方法给患者再次造成严重身心痛苦，给社会和家庭带来巨大医疗负担。

作为检测脑脊液中NF-H的一种方法，较为普遍的是酶联免疫吸附检测(ELISA)法，其基本原理是利用抗原、抗体的特异性反应，用已知抗原或抗体检测未知抗原或抗体。由于ELISA试验方法具有敏感、特异、经济、简便、安全等特点，目前在疾病的诊断和疗效观察以及预防医学等方面应用尤为广泛。

作为一种测定微量抗原、抗体的经典方法，ELISA法广泛应用于临床检验诊断，其技术成熟，用途广泛，分析灵敏度高、分析特异性好，操作简单。基本操作过程为：第一步，将抗原(或抗体)包被于固相载体(如聚苯乙烯塑料酶标板)上，放4℃冰箱过夜。第二步，用缓冲液洗包被板三次，加待测标本后放37℃温箱(或室温)反应1～2.5小时。第三步，用缓冲液洗板三次，加酶标抗体后置37℃温箱(或室温)反应1～2.5小时。第四步，用缓冲液洗板三次，加底物液显色，硫酸中止反应，上机判断结果。

作为ELISA发展的最新技术，发光ELISA将发光基团耦联到探测抗体，直接测量其所发光量来对抗原进行定量，既减少了酶/底物反应带来的附加干扰，又在极大程度上提高了探测灵敏度。

无论是通过影像学诊断还是ELISA脑脊液检测，目前，脑中风诊断的主要难点有：早期无症状或轻度症状，难以检测；实时诊断难以区分出血性中风或缺血性中风；长期治疗无法判断受损细胞类型和/或治疗效果，造成中风诊断水平普遍低下。因此，早期诊断、快速诊断、精确诊断，特别是无需脊髓穿刺获取脑脊液就能完成这样的诊断，对于降低脑中风的致残率和致死率具有特别重要的作用。

发明内容