[发明专利]草鱼抗疲劳活性肽的用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体是一种草鱼抗疲劳活性肽的用途。

背景技术

现代营养学研究发现，肽具有比游离氨基酸吸收快、吸收率好、生物效价高等特点，是具有多种生理功能的活性物质。其中，抗疲劳肽具有明显提高人体工作能力，增强肌肉含量和力量，维持或提高机体的运动能力，并且快速消除疲劳，迅速恢复和增强体力等功效，有助于在运动环境下维持人体健康。因此，抗疲劳肽成为从事体力、脑力、体育运动等人群的一种重要的功能性食品基料。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途的草鱼抗疲劳活性肽。上述草鱼抗疲劳活性肽有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高，其制备方法简单、成本低廉，生产周期短。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：草鱼抗疲劳活性肽的用途，用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。

草鱼抗疲劳活性肽的制备方法，包括以下步骤：

1）浸泡去腥：将草鱼鱼肉用清水洗净，浸泡于去腥液中1~4h，沥干；

2）分步酶解：在草鱼鱼肉中加入蒸馏水匀浆，草鱼鱼肉与蒸馏水的质量体积比为1g：5~15ml。

将匀浆液置于25~40℃的恒温环境中，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，加入枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和活性短肽酶解，酶解结束后灭酶，过滤取滤液；

3）等电点沉淀：调节滤液pH为5.5~6.5，静置后离心取沉淀；

4）纳滤：在沉淀中加蒸馏水溶解后置于蒸馏水中浓缩纳滤24~36h；

5）凝胶层析：用蒸馏水将Sephadex G-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液为纳滤浓缩液用蒸馏水稀释10~20倍得到；

6）高效液相色谱纯化：高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：1.7 μm BEH C18 色谱柱；流动相：0~5min，水；5~16min，60~70%水，30~40%乙腈；16~30min，40~60%水，40~60%乙腈；30~40min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长为254 nm和280 nm，收集主要色谱峰，冻干得到草鱼抗疲劳活性肽。上述草鱼抗疲劳活性肽可促进红细胞复原，提高红细胞携氧能力，并且在肌肉组织中氧化脱氨，一方面生成相应的α-酮酸进入三羧酸循环氧化供能，另一方面脱下来的氨基与丙酮酸或谷氨酸偶联，形成丙氨酸和谷氨酸酰胺，提供能量。有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高。

去腥液成分及其重量份为：5~10份柠檬酸、10~18份紫苏提取物、0.1~0.3份氯化钠、0.5~0.8份碳酸氢钠、20~30份乙醇和0.2~0.4份维生素E。草鱼身上的腥味物质特征成分是三甲胺，上述去腥液既能与三甲胺反应形成季铵盐，又能溶解三甲胺，去腥效果十分明显。

胰蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.2~0.7%，酶解pH为7.5~9.0，酶解温度为25~40℃，酶解时间为2~4h。枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.1~0.5%，活性短肽的加入量为枯草芽孢杆菌中性蛋白酶质量的1~5%，酶解pH为7.0~7.8，酶解温度为35~50℃，酶解时间为10~30min。采用胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌中性蛋白酶分步酶解，将匀浆液中大草鱼鱼肉蛋白酶解成分子量较小的活性物质。胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的酶解条件不同，采用分步酶解的方式使得两种蛋白酶的酶解效率均处于较高状态。活性肽的生物活性取决于肽链的氨基酸序列和长度及其空间结构，这意味着不同蛋白酶水解得到的活性肽的生物功能不同。单一的蛋白酶对蛋白质的酶切位点少，得到的多肽量少，多种蛋白酶同时酶解蛋白质得到的多肽量大，但容易破坏多肽活性，使之失去生物活性，上述分步酶解操作可最大程度酶解得到草鱼抗疲劳活性肽。

活性短肽的氨基酸序列为：HSHCVCSGTTHYVLHCVNCSR。上述活性短肽对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶有激活作用，即在活性短肽存在条件下，枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的酶解效率明显提高，降低了枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量并缩短了酶解时间。

与现有技术相比，本发明的优点在于：