[发明专利]一种外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置

说明书

技术领域

本发明属于细胞检测分离技术领域，特别是涉及一种新型外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置。

背景技术

循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CECs)是能够从外周血中可检测的血管内皮细胞，内皮细胞每天更新0-1％,因此，体内循环内皮细胞数量少。在多种疾病(心血管疾病、恶性肿瘤、创伤、炎症等)状态下，外周血中的循环内皮细胞的形态和数量均会发生变化，可作为反映血管内皮细胞损伤的直接和特异性生物标志。根据循环内皮细胞的不同功能状态可分为循环静息CEC和活化CEC；根据内皮细胞的发生学可分为内皮祖细胞和成熟内皮细胞。内皮细胞表面可表达多种的细胞表面的抗原如VEGFR-2、CD31、CD34、CDl06、CDl46等，联合这些细胞表面标志检测可以作为外周血内皮细胞计数和内皮细胞亚型分选的工具。外周血循环内皮细胞及亚型计数可作为多种疾病的预后和预测指标，对疾病的诊断和治疗有较为重要的作用。

然而，目前针对内皮细胞及亚型的检测多基于流式细胞技术检测，能够部分实现内皮细胞的计数，其只能完成总数的统计，不能对不同亚型进行分类统计及分离，并且存在着无法实现准确计数、检测及分离的缺陷。想要实现外周血中内皮细胞亚型的准确检测、计数和分离，目前现有技术中还没有很好的办法及装置。

发明内容

本发明提供了一种新型外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，解决了外周血循环内皮细胞亚型的准确检测计数问题，进一步的解决了外周血循环内皮细胞的分离问题。

具体技术方案是，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，包括荧光标记抗体检测管、单细胞液流发生器、激光发生器、信号接收器和信息处理器；荧光标记抗体检测管用于盛放荧光标记抗体；单细胞液流发生器用于使细胞成单细胞流排列，并且具有良好的光穿透性；激光发生器用于发射不同波长的激光；信号接收器用于接收激光发生器发出的与荧光混合后的激光，并且将信号传递给信息处理器；信息处理器用于将接收到的光的波长信号的变化进行处理分析最终实现血循环内皮细胞亚型的检测计数。另外设置在荧光标记抗体检测管单细胞液流发生器可以为多个，以便提高计数效率。

使用前，首先进行外周血循环内皮细胞标记，①准备抗体：用0～4℃磷酸盐缓冲盐水(其为pH8.0)将抗体CD34、CD146、CD133和CD106溶液分别稀释至浓度为30～40ug/ml，在冰槽上置于三角烧瓶内②准备荧光素：按每微克蛋白加入荧光素10ug计算，将荧光素用中碳酸钠水(其浓度为3％)溶液溶解。③将所准备的抗体与荧光素溶液进行等量混合、混匀，置于0～4℃冰箱中过夜，即可应用于外周血中循环内皮细胞的检测。④在检测时，每毫升血液先后加入含有荧光素的抗体CD34、CD146、CD133和CD106，每种抗体加入的量为10-20uL，反应2小时后就可进行内皮细胞亚型计数检测了。

工作原理，标记后的外周血循环内皮细胞加入到荧光标记抗体检测管中，然后与单细胞液流发生器连接，然后标记后的外周血循环内皮细胞进入单细胞液流发生器中，因为单细胞液流发生器官腔的直径略大于一个内皮细胞的直径，约5uL，因此使得细胞在管内呈单细胞液流排列。而又因单细胞液流发生器具有良好的光穿透性，因此激光发生器发出不同波长的激光时通过单细胞液流发生器与被标记后的CD34、CD146、CD133或CD106内皮细胞相交，因为不同波长的荧光与激光混合可发生光学改变，而信号接收器又设置在激光发生器对面，因此可以很好的接收光学改变后的激光信号，之后将信号传递给信号处理器，光信号的变化经过信号处理器处理，每个内皮细胞经过激光是光强度的变化计数为一个内皮细胞，激光和不同荧光混合产生混合光，其波长有所不同。根据信号处理器所接收的不同波长光进行内皮细胞亚型计数。

本发明所属的外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，不仅限于处理CD34、CD146、CD133或CD106内皮细胞而且也适用于其它抗体。