[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌Lxz-41及利用该菌株可控制备纳米硒的方法

权利要求书

1.一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Lxz-41，保藏编号为：CCTCCNO：M2016578，保藏在中国典型培养物保藏中心，该菌株具有可控生产纳米硒的能力。

2.一种利用权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Lxz-41可控生产纳米硒的方法，其特征在于，包含以下步骤:

S1.菌种活化：将保藏菌株接于牛肉膏蛋白胨或LB试管琼脂斜面培养基上，25-40℃静止培养活化，待菌落长满斜面；

S2.种子培养：将斜面培养菌种接种于含有硒盐的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，装液量为容器容量的20%，25-40℃、80-200r/min振荡培养12-24h，得种子液；

S3.纳米硒可控生产：将种子培养液按照1%-5%接种量接种至装有发酵培养基的发酵容器中，所述发酵培养基中包括硒盐，硒盐采用流加形式加入，发酵培养基装液量为发酵容器容量的40%-70%，搅拌速率50-200r/min、通气量0.5-2.0vvm，温度保持25-40℃，发酵时间24-72h；

S4.纳米硒提取纯化：发酵液下罐，4000-10000r/min4℃冷冻离心10-20min，收集得到菌体，用约1/4发酵液体积无菌生理盐水冲洗三次，用约1/20体积无菌蒸馏水进行悬浮，进行冰浴超声破壁20-40min，菌体裂解液 4000-10000r/min4℃冷冻离心10-20min，沉淀用同体积去离子水清洗三次，并用约1/2体积蒸馏水悬浮，得到纳米硒悬液，加入同体积氯仿进行萃取30min，萃取2-3次，合并下层水相，用均质机均质2-5min，4000-10000r/min4℃冷冻离心10-20min，沉淀用等体积无菌生理盐水清洗3次，冷冻干燥即得微生物纳米硒。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于， S2中牛肉膏蛋白胨液体培养基中的硒盐为亚硒酸盐、硒酸盐中的一种或几种，质量体积比为100-500mg/L。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，对S2、S3培养基中的硒盐进行单独灭菌，然后加入到灭菌后的培养基中。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S3中发酵培养基组分为（g/L）：葡萄糖10，蛋白胨5， 硫酸铵1，七水硫酸镁0.3，磷酸二氢钾0.5，磷酸氢二钾0.5，氯化钠2，硒盐0.1-4.5，表面活性剂0.5-1， pH=7.2-7.4。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，S3中发酵培养基中的硒盐用母液分批流加形式或连续流加形式，以控制发酵液中硒盐的浓度，进而控制菌株的转化效率，所述硒盐为亚硒酸盐、硒酸盐中的一种或几种。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，发酵培养基中分批流加或连续流加亚硒酸钠，所用亚硒酸钠母液的浓度为50-500g/L。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S4中超声破碎功率400W-1000W,频率20-40KHz，启停间隔10-15s，破碎20-40min。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂为SDS、吐温40、吐温60、吐温80中的一种或几种。

10.含有权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌Lxz-41的复合微生物菌剂。