[发明专利]一种对CTX药物不良反应SNP位点基因型检测方法及试剂盒

说明书

一种对CTX药物不良反应SNP位点基因型检测方法及试剂盒，本发明涉及分子生物学和医学领域，本发明提供的试剂盒针对人类基因组DNA中环磷酰胺不良反应风险的SNP位点，即GSTP1基因rs1695，设计特异性引物和探针，与带有相应报告基因的MagPlex‑TAG磁珠进行杂交反应，通过显色反应在luminex 200仪器上进行检测。通过对信号值的读取判读各个SNP位点的碱基型别进行判定。本发明的有益效果在于，针对系统性红斑狼疮及其他疾病患者使用环磷酰胺不良反应风险相关的SNP位点设计特异引物、探针和报告基因探针序列，可分型检测该SNP位点的型别。本发明提供的检测试剂盒可以灵敏、快速低检测该SNP型别，可为系统性红斑狼疮患者用药不良反应风险预测提供可靠的实验证据，指导临床治疗选择。

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一组环磷酰胺药物不良反应风险SNP位点的试剂盒，通过同时检测环磷酰胺毒副作用风险密切相关的GSTP1基因和MTHFR基因的单核苷酸多态性位点(SNP)基因型来评估环磷酰胺在系统性红斑狼疮患者及其他疾病使用中的不良反应作用风险。

背景技术

SLE是一种常见的自身免疫病，环磷酰胺在SLE的治疗上有重要的地位，是治疗重症SLE的有效药物。糖皮质激素联合大剂量环磷酰冲击已成为治疗系统性红斑狼疮或狼疮性肾炎的标准方案，环磷酰胺能改善SLE的病情，是较强的细胞免疫抑制剂，但CTX又是比较有争议性的药物之一，具有严重的、甚至致命的近期和远期毒副作用。

研究表明，GSTP1参与CTX及其代谢产物的代谢，其基因的突变导致了酶活性的改变，进而影响了CTX的体内处置过程，影响CTX的疗效并产生不良反应。,GSTP1对CTX的疗效和毒副作用有非常重要的意义。

GSTP1基因定位于染色体11q13，该基因全场约3kb,GSTP1第5个外显子的一个位点(A131G)的A突变为G导致两个氨基酸的酶的活性部位被取代，即异亮氨酸转变为缬氨酸，缬氨酸转变为丙氨酸。这些多态性改变了蛋白质的功能，降低GSTP1活性及对底物的特异性。GSTP1的突变导致其酶活性降低，因而对环磷酰胺毒性代谢产物的代谢缓慢，使不良反应增加。

研究表明GSTP1突变型出现骨髓抑制的危险性是野生型的11.0倍。GSTP1(I/V或V/V)组的骨髓抑制和胃肠道的反应的发生率显著高于GSTP1(I/I)组。GSTP1突变型的病人也易出现骨髓抑制，对于携带这些基因型的SLE患者可适当减少CPA的给药剂量。

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR基因)位于1p36.22，是亚甲基四氢叶酸还原酶蛋白编码基因。MTHFR基因C677T(rs1801133)和1298C(rs1801131)位点突变可导致MTHFR酶活性下降。C677T(rs1801133)携带CT或TT基因型的患者比携带有CC基因型的患者更易发生不良反应。MTHFRC677T多态性与毒性增加相关，携带C677T位点的T等位基因患者发生不良反应的风险高。同样，研究发现：MTHFR基因1298C(rs1801131)与环磷酰胺药物不良反应相关。

发明内容

本发明提供的试剂盒针对人类基因组DNA中环磷酰胺不良反应风险的SNP位点，即GSTP1基因rs1695，设计特异性引物和探针，与带有相应报告基因的MagPlex-TAG磁珠进行杂交反应，通过显色反应在luminex 200仪器上进行检测。通过对信号值的读取判读各个SNP位点的碱基型别进行判定。

本案中试剂盒内包括的特异引物序列如下：

特异探针序列如下：