[发明专利]一种简单快速检测易成花荔枝种质资源的方法在审
| 申请号： | 201711015173.0 | 申请日： | 2017-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN107586873A | 公开（公告）日： | 2018-01-16 |
| 发明（设计）人： | 张树伟;丁峰;彭宏祥;陈厚彬 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院园艺研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279 | 代理人： | 朱志宽 |
| 地址： | 530007 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 简单 快速 检测 易成花 荔枝 种质 资源 方法 | ||
1.一种简单快速检测易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)收集不同荔枝种质资源，并提取待检测荔枝的DNA；
(2)引物设计：在低温敏感型和低温不敏感型LcFT1基因启动子small indels突变两端相同的区域设计一对上下游引物LcCeED-F1和LcCeED-R1，用于鉴定易成花荔枝种质资源；引物LcCeED-F1和LcCeED-R1检测低温敏感型LcFT1基因启动子目的片段大小为446bp，其具有如Seq ID NO.3所示的序列；检测低温不敏感型LcFT1基因启动子目的片段大小为434bp，其具有如Seq ID NO.4所示的序列；
(3)PCR扩增：分别以待检测的荔枝DNA为模板进行PCR扩增，扩增的PCR产物经1.5％浓度的琼脂糖电泳检测；
(4)PCR产物毛细管电泳检测：取1μL的PCR产物分别加入9μL的去离子甲酰胺和1μL的GS3730-500分子量内标，95℃预变性5min，4℃再保温10min，然后通过ABI3730XL DNA分析仪进行毛细管电泳，再用GeneMarker V1.91 Demo软件进行分析生成图谱；
(5)易成花荔枝种质资源的鉴定分析：以待检测的荔枝DNA样品为模板进行PCR扩增，PCR扩增产物经毛细管电泳检测，如果在434bp处出现单一峰值，则表明待检测荔枝为LcFT1基因纯合低温不敏感型荔枝种质资源；如果在434bp和446bp处同时出现两个峰值，则表明待检测荔枝为LcFT1基因低温敏感型和低温不敏感型的杂合易成花荔枝种质资源；如果在446bp处出现单一峰值，则表明待检测荔枝为LcFT1基因纯合低温敏感型易成花荔枝种质资源。
2.根据权利要求1所述的简单快速检测易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的上游引物LcCeED-F1为Seq ID NO.1所示的序列，所述的下游引物LcCeED-R1为Seq ID NO.2所示的序列。
3.根据权利要求1所述的简单快速检测易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的PCR扩增的反应体系具体组成如下：2×Taq PCR MasterMix(TIANGEN)12.5μL，DNA模板1μL，上游引物1μL，下游引物1μL，水9.5μL，共25μL。
4.根据权利要求3所述的简单快速检测易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，所述的上游引物为Seq ID NO.1所示的序列，所述的下游引物为Seq ID NO.2所示的序列。
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