[发明专利]基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法

说明书

基于¹H‑NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，属于中药鉴定技术领域。本发明应用¹H‑NMR的代谢组学技术研究鲜鹿茸与热炸茸的化学成分差异，通过多元数据处理模式对鹿茸鲜品和炮品进行鉴别。与现有鹿茸鉴定技术相比，本发明具有明显的优势：从整体上阐明鹿茸的代谢产物，能系统的比较代谢产物之间的差异；PCA、PLS‑DA与OPLS‑DA层层递进，保证了实验结果的准确性；丰富的核磁数据结合现代高科技分析软件，能保证实验结果的稳定、可控，具有宏观准确性和微观精确性。该方法还具有简单、方便、快速、经济，适合于市场和一般个体应用的广泛性和简便性。

技术领域

本发明属于中药鉴定技术领域，特别是涉及到一种基于¹H-NMR质子核磁共振谱的代谢组学技术鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法。

背景技术

鹿茸是一种传统名贵中药，为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。鹿茸作为传统的临床治疗药物,在我国已有几千年的历史。2015版《中国药典》中记载鹿茸味甘、性温，壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒。现代药理学研究表明鹿茸具有多方面的药理作用，其对心肌损伤有保护作用，能修复骨缺损，促进伤口愈合，提高机体免疫功能，促进脂肪分解，延缓衰老，改善学习记忆。目前，鹿茸的化学成分还未能找到能代表其广泛活性的物质。综合各家报道，其有效成分主要有氨基酸、蛋白、肽、多胺、维生素、激素、核酸、碱基、脂质类、芳香族化合物、无机元素等。

鹿茸始载于《神农本草经》,是我国传统名药之一,与人参、灵芝、冬虫夏草和阿胶并称为中华养生五大圣品，是驰名中外的珍稀中药材和名贵补品。在中药市场鱼目混珠，秩序张乱的当今时代，商品鹿茸通常更容易遭到掺假，准确鉴别鹿茸生品和炮品对临床用药及保健品质量控制十分重要。鹿茸中丰富的蛋白质、氨基酸以及矿物元素等营养元素可作为鹿茸的质量控制和药效研究的依据,与鹿茸的品质特征密切相关。然而,长期以来,关于鹿茸品质特征的研究很少。

因此,研究鲜鹿茸与热炸茸中差异性营养成分,对快速准确的鉴别鹿茸生品和炮制品及确保鹿茸的品质特征有着极其重要的意义。

代谢组学技术以组群指标分析为基础，借助高通量检测和数据处理手段，具有整体观的研究思路，特别适合中药这种多成分、复杂体系的分析^[8-9]。基于核磁共振的代谢组学分析具有备样简单、重复性好、分析时间短，能同时检测到各种极性化合物的优势，此方法已成功运用于多种中药的分析中，但仅有阿胶、驴皮两种动物药运用此分析手段。

多元统计分析是针对多成分、多靶点复杂中药分析的最常用的化学计量学方法。主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等已经广泛用于食品、药品和农产品等的快速识别，PCA 利用降维思想，将观测指标的维数降低，已获得较低维数的指标，可大量的减少分析的数据而能够最大量的获得可供参考的数据信息。同时，PCA是一种非监督性的的数据分析平台，想要获得更有力的信息，需对数据进一步考证分析，还需进行有监督的偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)，可以提供除回归方程之外的主成分分析和典型相关分析的相关信息。正交偏最小二乘判别分析 (OPLS-DA)是对PLS的补充分析，结合了正交信号校正(OSC)和PLS两个方法，能够将X矩阵信息(NMR数据)分解成与Y(分类信息)相关和不相关的两类信息，通过除去不相关的差异，相关的信息就集中表现在第一预测成分，因此可以通过对集中在第一预测成分上的变量的筛选找出特征性变量，从而找出特征性代谢物，因此，OPLS-DA方法建立多元数据统计模型用于分子标志物的筛选。

通过多元数据处理模式，用以判别鹿茸生品与炮品真伪。该方法不仅可以有助于鹿茸生品与炮品质量标准的建立，也为其他中药鉴别研究提供了一定的思路。

发明内容