[发明专利]用于快速鉴定猪的红黑毛色基因的核酸、试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种用于快速鉴定猪的红黑毛色基因的核酸、试剂盒及方法，其核酸包括红毛特异性引物、黑毛特异性引物和下游通用引物，其中，所述红毛特异性引物的序列如SEQ ID No.1所示，所述黑毛特异性引物的序列如SEQ ID No.2所示，所述下游通用引物的序列如SEQ ID No.3所示。本发明提供的方法可用于鉴别杜洛克和以黑为主要被毛颜色的如太湖猪、盆周山地猪、莱芜猪杂交后代的毛色，从分子水平上对杂交后代进行早期筛选，从而快速获得可稳定遗传的黑毛色猪种的检测结果，该方法快速、简单易操作，成本较低，可用于大规模检测及育种实践。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于快速鉴定猪的红黑毛色基因的核酸、试剂盒及方法。

背景技术

在猪的杂交育种中，毛色作为一个很重要的表型性状通常将其作为一个品种的标志性特征，毛色性状能否稳定遗传是一个品种是否成功培育的标志。另一方面，毛的颜色会影响消费者对该产品的认可度，直接影响其经济效益。因此，对毛色进行快速鉴定、使培育品种的毛色快速纯合，可加快选育进展，提高选育效率，节约选育成本。被毛黑色的中国地方猪如太湖猪、盆周山地猪等，以高繁殖性能及较好的肉品质闻名，是世界公认的宝贵猪种遗传资源，通常在进行品种培育的时候会被作为母本。而被毛红色的杜洛克猪种因其产肉性能较突出，在品种培育中常作为父本。当以太湖猪、盆周山地猪、莱芜猪为母本、杜洛克为父本培育新品种系的时候，其杂交后代会出现毛色不整齐，可出现黑色、红色、红白条纹、红黑条纹等多种颜色，这种毛色性状分离的现象，严重影响新培育品种的一致性和整齐度。但传统的育种方法是通过一代代剔除红毛色和花纹毛色后代，这需要耗费育种工作者大量时间，浪费许多的经济成本和时间成本。因此，快速对两种毛色进行鉴定，并剔除不需要的毛色在育种实践中尤为重要。

猪的毛色遗传机理较复杂，涉及到一系列色素沉积相关基因和信号通路，任何一个或几个基因位点的突变都会引起毛色的改变。黑素皮质素受体1(melanocortin1-receptor，MC1R)基因是控制动物黑色素合成的重要基因，它的正常表达可使黑色素沉积，呈现真黑色，而该基因的突变会影响真黑色素的生成和沉积，从而引起毛色呈现其他颜色。研究报道杜洛克的红毛色是由于MC1R基因其中一个或几个位点突变引起的。我们的研究发现杜洛克的红毛色对太湖猪、盆周山地猪、莱芜猪的黑毛色为隐性，经统计分析，基本符合经典的孟德尔遗传定律。

因目前针对MC1R的红毛色突变位点的确切的功能证据还没有，文献报道，在杜洛克与梅山猪(太湖猪的一个类群)之间共有7个位点不同(SHI Kerong等2004，Science inChina Ser.C Life Sciences，Vol.47No.3 287-292)，而Dun等(J GenetGenomics.2007Sep；34(9):777-782.)认为668G--C,1318C--T,and 1554G--A可能可以用以区别长白、大白猪与杜洛克猪的毛色。本发明的发明人根据突变氨基酸的功能结构预测认为该基因mRNA序列第727位位点可能是引起红黑毛色表型差异的关键位点，对毛色基因进行检测的方法主要是采用PCR-SSCP或PCR-RFLP的方法进行，但由于该位点没有限制性内切酶位点，且临近的729位还有一个突变位点，会影响该位点的基因分型，导致结果不准确。此外，这些方法还存在步骤复杂、效率低、成本高、对人员要求高等缺点，不适用于大规模检测并应用于育种实践。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于快速鉴定猪的红黑毛色基因的核酸、试剂盒及方法，该方法可用于鉴别杜洛克和以黑毛色为主的太湖猪、盆周山地猪、莱芜猪杂交后代的毛色，从分子水平上对杂交后代进行早期筛选，从而快速获得可稳定遗传的黑色猪种的检测结果，该方法快速、简单易操作，成本较低，可用于大规模检测及育种实践。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：