[发明专利]利用茎尖组织繁殖大花蕙兰种苗的方法

权利要求书

1.一种利用茎尖组织繁殖大花蕙兰种苗的方法，其特征在于，

所述方法包括以下步骤：

步骤a，外植体的选取，切取大花蕙兰母株基部长出的6-12cm的健壮侧芽；

步骤b，侧芽消毒，对切取的侧芽进行消毒，切下茎尖组织作为培养的外植体；

步骤c，原球茎诱导培养，将外植体接种到原球茎诱导培养基上，培养30-60天，培养温度为25-28℃，光照时间为8-14h/d，光照强度为1000-2000lux诱导得到原球茎；所述诱导培养基由以下成分组成：花宝3号2g/L，水解酪蛋白3g/L，腺嘌呤1g/L，活性炭1g/L，琼脂7g/L，蔗糖20g/L；

步骤d，原球茎增殖培养，将诱导形成的原球茎团切割成小块，每块含3-5个原球茎，接种到增殖培养基中，逐渐形成新的原球茎，反复切割增殖，每30-40天继代转接一次；所述增殖培养基的成分与诱导培养基成分相同；

步骤e，原球茎分化培养，将增殖得到的原球茎团切割成小块，每块含5-10个原球茎，接种到分化培养基中进行分化培养，原球茎分化出新叶新根；分化培养基由以下成分组成：花宝3号2g/L，水解酪蛋白3g/L，腺嘌呤1g/L，TDZ0.1 mg/L，活性炭1g/L，琼脂7g/L，蔗糖20g/L；

步骤f，生根壮苗培养，切取分化培养后高5-6cm的芽，接种到生根壮苗培养基中进行培养，得到生长健壮的种苗，其中生根壮苗培养基由以下成分组成：花宝1号1-4g/L，硝酸钾0.7-2.1g/L，七水硫酸亚铁18-32mg/L，二水乙二胺四乙酸二钠30-43g/L，水解酪蛋白2-4g/L，腺嘌呤0.5-1.5g/L，土豆泥12-28g/L，香蕉泥35-65g/L，椰子汁50-150mL，活性炭0.5-1.5g/L，琼脂6-8g/L，蔗糖14-27g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b中，对侧芽进行消毒的方法包括以下步骤：

将切取的侧芽用流水冲洗干净，层层剥去外层叶片，切除侧芽基部木质化组织，直到剩下6-8片叶，12％的次氯酸钙消毒15min，然后拿到无菌工作台上进一步消毒；

继续剥去茎尖外层叶片，直到剩下3-5片叶，5％的次氯酸钙消毒12min；

继续剥外层叶片，直到剩下1-2片叶，1％次氯酸钙消毒6min；在显微镜下面，小心剥去生长点外层的幼叶，直到露出生长点；切下含生长点的茎尖组织，作为培养的外植体。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将含生长点的茎尖组织从中心均匀切成4小块，或者2小块，每块单独接种到诱导培养基中。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，生根壮苗培养基由以下成分组成：花宝1号2g/L，硝酸钾1.5g/L，七水硫酸亚铁27.8mg/L，二水乙二胺四乙酸二钠37.3g/L，水解酪蛋白3g/L，腺嘌呤1g/L，土豆泥20g/L，香蕉泥50g/L，椰子汁100ml/L，活性炭1g/L，琼脂7g/L，蔗糖20g/L。