[发明专利]一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法

权利要求书

1.一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)提取待检细菌的基因组DNA；

(2)以提取的细菌的基因组DNA为模板，使用高保真DNA聚合酶及引物PCR扩增，扩增产物经酶切、纯化后进行TA克隆；

(3)筛选TA克隆的阳性转化子，提质粒进行测序及比对，初步鉴定嗜酸乳杆菌NCFM；

所述三对引物的序列为：

plb16A:ACGAGACTTTGAGTCTGGCTCAG，

mlb16A:ACCGACGCTGCGTCCACGTAGTTAG,

plb16B:TTAACTGGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAG,

mlb16B:GTAACTGGGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAG,

plb16X:ACGCCAGTTTTATCCTGGCTCAG，

mlb16X:TATCCACGCGTCTGCTGGCACGTAGTTAG。

2.根据权利要求1所述的一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，其特征在于：所述的高保真DNA聚合酶为超保真DNA聚合酶、超保真DNA聚合酶、系列高保真DNA聚合酶或Platinum^TMPfx DNA聚合酶。

3.根据权利要求1所述的一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，其特征在于：所述扩增产物酶切步骤中具体操作是将扩增得到的PCR产物用AhdI、BmrI、XcmI限制性内切酶进行酶切。

4.根据权利要求1所述的一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min，94℃循环变性15s，55℃退火15s，72℃延伸1min，35个循环，72℃终继续延伸10min。

5.根据权利要求1所述的一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，其特征在于：TA克隆中T载体是pBackZero-T Vector、pMD 18-T Vector、pMD 19-T Vector、pMD20-T Vector、pGEM-T Vector、pGEM-T Easy Vector、pGM-T Vector、pGM-T Fast Vector、pGM-Simple-T Fast Vector、pCR2.1-TOPO Vector、pCRII-TOPO Vector、pCR4-TOPO Vector、pCR8/GW/TOPO Vector、pSLO-T Vector或pSLR-T Vector。