[发明专利]胶质瘤诊断标志物Circ2:23823258|23823569及应用

说明书

本发明公开了胶质瘤诊断标志物Circ2:23823258|23823569及应用。在本发明中，首次发现：胶质瘤细胞所分泌的外泌体对Circ2:23823258|23823569具有明显的富集作用；同时发现胶质瘤患者血清外泌体中Circ2:23823258|23823569的表达水平相比于对照组明显升高(p0.0001)，ROC曲线分析显示其对胶质瘤具有较高诊断价值(AUC＝0.811，p＝0.002，敏感度和特异度分别为66.7％和91.7％)。因此通过检测胶质瘤患者血清外泌体中Circ2:23823258|23823569的表达水平，可对胶质瘤患者做出早期、快速的无创性诊断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤诊断的血清circRNA标志物Circ2:23823258|23823569、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤诊断制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

脑胶质瘤是颅内最常见的恶性神经上皮细胞肿瘤，占颅内肿瘤的40.49％，是成人最常见的脑部肿瘤之一。从确诊开始，脑胶质瘤患者平均生存寿命不超过五年。目前胶质瘤的治疗技术多样，但由于肿瘤浸润侵袭速度快，以及对放化疗介导的细胞凋亡不敏感等特性，总体治疗效果不佳，复发率高，预后差，因此寻找新的治疗靶点和预后指标至关重要。目前胶质瘤诊断仍然处于以临床、病理学和影像学信息为基础的经验性阶段，而且一经诊断，绝大多数均为中晚期，术后生存率不容乐观。因此，寻找胶质瘤诊断标志物对高危人群进行筛查，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

circRNA是一类不同于线性RNA，广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中的内源性封闭环状非编码RNA分子，其结构稳定，不易受RNA外切酶影响，能在转录，转录后，翻译等水平多层次调控基因表达，广泛存在于各类细胞中，脑部丰度极高。circRNA近年来已成为非编码RNA领域的新热点。随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例，并具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特征，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体CircRNA标志物。

主要内容包括：一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体CircRNA标志物Circ2:23823258|23823569，其序列如SEQ NO:1所示。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的CircRNA标志物在血清外泌体中表达量的试剂在制备胶质瘤诊断制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤诊断试剂盒，其能够测定血清外泌体中的Circ2:23823258|23823569的含量。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，含有检测Circ2:23823258|23823569含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，除Circ2:23823258|23823569的引物外，还含有从血清中提取外泌体、由外泌体中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。

包括：

(1)提取血清外泌体所需试剂：Total Exosome Isolation Reagent(fromserum)，可由Invitrogen公司购得，货号4478360；

(2)提取外泌体RNA所需试剂：Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、75％乙醇、无酶水；

(3)逆转录所需试剂：随机引物(Random Primer)、无酶水、5×逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶；