[发明专利]胶质瘤预后标志物Circ9:135881633|135883078的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的脑组织来源的circRNA标志物的应用，即检测该标志物的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用。

背景技术

脑胶质瘤是成年人最为频发的脑肿瘤疾病，占颅内肿瘤的40.49％。从确诊开始，脑胶质瘤患者平均生存寿命不超过五年。为了诊治胶质瘤这种与遗传物质相关性极高的恶性疾病，必须在分子生物学水平，从遗传信息表达的方面来探索其发病机理。目前而言胶质瘤的诊断和治疗方法虽处于不断改进阶段，但是胶质瘤患者生存率并没有明显提高。胶质瘤诊断仍然处于以临床、病理学和影像学信息为基础的经验性阶段，而且一经诊断，绝大多数均为中晚期，手术后的生存率不容乐观。因此，寻找胶质瘤预后标志物对患者进行预后分析，以及提高胶质瘤患者的术后生活质量，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决的研究任务。

circRNA是一类广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子，具有共价闭合的环形结构，广泛存在于各种细胞中，也是继microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究热点。近年来，随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例，并具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特征，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的目的是提供检测脑组织中circRNA Circ9:135881633|135883078表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用，该circRNA Circ9:135881633|135883078序列如SEQ NO:1所示。

所述的检测脑组织中Circ9:135881633|135883078表达量的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括进行实时荧光定量PCR的特异性引物，序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂为试剂盒，

所述的试剂盒，除Circ9:135881633|135883078的引物外，还含有从脑组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将circRNA Circ9:135881633|135883078逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及circRNA Circ9:135881633|135883078所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNA Circ9:135881633|135883078实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。

本发明研究证实脑组织来源的环状RNA Circ9:135881633|135883078可用于胶质瘤患者预后分析，脑组织来源的环状RNA Circ9:135881633|135883078表达量与患者术后生存率具有相关性。因此，可用于胶质瘤患者的预后分析。

申请人通过荧光定量PCR与生存曲线分析发现胶质瘤组织来源的环状RNA Circ9:135881633|135883078与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高。此法为胶质瘤的预后分析提供了强有力的技术支持，有助于提高胶质瘤患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义和推广性。

附图说明

图1为实时荧光定量PCR分析Circ9:135881633|135883078在胶质瘤组织与正常脑组织中表达差异；

图2为生存曲线分析胶质瘤组织来源的Circ9:135881633|135883078表达高低对胶质瘤患者的预后影响。

具体实施方式

以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1制备检测环状RNA Circ9:135881633|135883078表达量的试剂用于制备胶质瘤患者预后的试剂盒(50次反应)

1.RNA稳定溶液50ml

2.异丙醇100ml

3.三氯甲烷100ml

4.Trizol 50ml

5.无酶水10ml