[发明专利]改善文库滚环复制效率均一性的方法、文库构建方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201711027564.4 | 申请日： | 2017-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN109722471B | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 邱敏;李计广;王静静;刘二凯;黎宇翔;冯太青;马可心;赵芳;齐晓娟;龙小娟;韦小芳;陈奥;章文蔚;徐崇钧 | 申请（专利权）人： | 深圳华大智造科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C40B50/06 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518083 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 改善 文库 复制 效率 均一 方法 构建 试剂盒 | ||
1.一种改善文库滚环复制效率均一性的方法，所述滚环复制效率均一性是指大片段和小片段之间的滚环复制效率趋向一致的表现，其特征在于，所述方法包括：在文库构建的PCR扩增过程中，引入至少一种修饰的PCR引物，所述修饰的PCR引物在至少一个核苷酸位点上具有至少一个用于减缓滚环复制反应速度的修饰基团。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸位点是脱氧胸苷酸位点。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述修饰基团选自生物素、Cy3荧光染料和地高辛中的至少一种。
4.一种用于滚环复制反应的文库的构建方法，其特征在于，所述方法包括：在文库构建的PCR扩增过程中，引入至少一种修饰的PCR引物，所述修饰的PCR引物在至少一个核苷酸位点上具有至少一个用于减缓滚环复制反应速度的修饰基团。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)对片段化的核酸进行末端修复和加A尾反应；
(2)对末端修复和加A尾反应后的产物进行接头连接反应；
(3)对接头连接反应后的产物进行PCR扩增反应，在该PCR扩增反应中，引入至少一种修饰的PCR引物，所述修饰的PCR引物在至少一个核苷酸位点上具有至少一个用于减缓滚环复制反应速度的修饰基团。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
(4)在所述PCR扩增反应后，对扩增产物进行单链分离和环化反应。
7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，所述核苷酸位点是脱氧胸苷酸位点。
8.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，所述修饰基团选自生物素、Cy3荧光染料和地高辛中的至少一种。
9.一种用于改善文库滚环复制效率均一性的试剂盒，所述滚环复制效率均一性是指大片段和小片段之间的滚环复制效率趋向一致的表现，其特征在于，所述试剂盒包括：至少一种修饰的PCR引物，所述修饰的PCR引物在至少一个核苷酸位点上具有至少一个用于减缓滚环复制反应速度的修饰基团，所述修饰的PCR引物用作文库构建的PCR扩增过程中的引物。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述核苷酸位点是脱氧胸苷酸位点。
11.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述修饰基团选自生物素、Cy3荧光染料和地高辛中的至少一种。
12.一种用于构建滚环复制文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：至少一种修饰的PCR引物，所述修饰的PCR引物在至少一个核苷酸位点上具有至少一个用于减缓滚环复制反应速度的修饰基团，所述修饰的PCR引物用作文库构建的PCR扩增过程中的引物。
13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括如下至少一项：
末端修复试剂；
加A尾反应试剂；
接头序列；
PCR扩增反应试剂；
线性核酸消化酶；以及
核酸片段化酶。
14.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述核苷酸位点是脱氧胸苷酸位点。
15.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述修饰基团选自生物素、Cy3荧光染料和地高辛中的至少一种。
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