[发明专利]一种基于锌的功能核酸的耐高盐比色传感器及其应用

权利要求书

1.一种基于锌的功能核酸的耐高盐比色传感器，其特征在于，包括分子识别元件、信号放大元件和信号转换元件，其特征在于，

所述分子识别元件包括锌离子脱氧核酶；所述锌离子脱氧核酶由底物链和酶链组成；

所述信号放大元件包括等温扩增体系，

所述脱氧核酶底物链的序列(5’-3’)为：

GCTAGAGATTTTCCACACTGATGCAGACGTTGAAGGATTATCTACTAAAAGGGTCTGAGGG；

所述脱氧核酶酶链的序列(5’-3’)为：AGATAATCTAGTTGAGCTGTCTGCAT；

所述扩增模板的序列(5’-3’)为：CCCAACCCGCCCTACCCCCCAACCCGCCCTACCCAACTGACTCCCCTCAGACCCTTTTAGTAGATAATCCT；

所述信号转换元件包括硫代黄色素；所述等温扩增体系包括A体系和B体系；

所述A体系包括：扩增模板、dNTPs和锌离子脱氧核酶切割产物；

所述B体系包括：Bst DNA聚合酶及其缓冲溶液、Nt.BstNBI切刻内切酶及其缓冲溶液。

2.权利要求1所述传感器在锌离子检测中的应用。

3.一种检测锌离子的方法，其特征在于，包括如下步骤：

制备锌离子浓度和G-四链体功能核酸荧光强度关系的标准曲线；

按上述制备标准曲线的过程测定待测样品的G-四链体功能核酸荧光强度值，通过上述标准曲线计算锌离子的浓度；

其中，制备标准曲线的步骤包括：

(1)在锌离子脱氧核酶的底物链和酶链中加入不同浓度锌离子溶液，制备锌离子脱氧核酶切割产物；

所述脱氧核酶底物链的序列(5’-3’)为：GCTAGAGATTTTCCACACTGATGCAGACGTTGAAGGATTATCTACTAAAAGGGTCTGAGGG；

所述脱氧核酶酶链的序列(5’-3’)为：AGATAATCTAGTTGAGCTGTCTGCAT；

(2)将扩增模板，dNTPs，切割产物和超纯水混合均匀，制备A体系；将Bst DNA聚合酶，聚合酶反应缓冲溶液，Nt.BstNBI切刻内切酶和Nt.BstNBI切刻内切酶的反应缓冲溶液混合均匀，制备B体系；

所述扩增模板的序列(5’-3’)为：CCCAACCCGCCCTACCCCCCAACCCGCCCTACCCAACTGACTCCCCTCAGACCCTTTTAGTAGATAATCCT；

(3)A体系先进行孵育，然后与B体系迅速进行混合，孵育扩增，终止反应后得到扩增产物；

(4)将扩增产物、硫代黄色素原液、显色缓冲液与超纯水混匀并反应，形成G-四链体结构；

(5)测定步骤(4)的反应混合液的荧光强度，得到荧光强度随锌离子浓度变化的标准曲线。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)的操作为：将脱氧核酶底物链和酶链用缓冲液稀释，95℃加热15min，然后缓慢降至25℃；加入待测锌离子溶液，25℃孵育6min，加入终止液，得到切割产物。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)的操作为：A体系于55℃孵育5min，然后与B体系迅速进行混合，55℃孵育扩增20min，95℃保持10min以终止反应。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(4)中反应温度为25℃，反应时间为20min。