[发明专利]一种细胞保存方法、保存液及保存液制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞保存制剂技术领域，具体来说，涉及一种细胞保存方法、保存液及保存液制备方法。

背景技术

保存液要保持细胞的生物活性以满足其在临床上的应用，因此，如何维持细胞的高活性成为治疗关键。在此之前，人们用生理盐水或葡萄糖溶液作为保护液，但是由于缺乏营养、溶液等张力或等渗透力存在差异等原因，导致细胞在长期保存或运输中出现活力低下、大量溶胀死亡等现象。随后，人们不断改善保存液的组成体系，添加了KCl、柠檬酸钠，白蛋白、维生素等，形成保存液。虽然这些保存液在较长时间内很好的维持了细胞活性，但组成成分复杂，配制过程繁琐。

专利公开号为CN104542578A的中国专利申请公开了一种细胞保存液，其包括白蛋白、葡萄糖、维生素C和保存基础液，保存基础液为复方电解质注射液和复方氨基酸注射液的混合物。该细胞保存液缺点在于该保存液对细胞的生物活性保护还不够理想，保存细胞活率未达到令人满意的效果。为了适应临床的需要，开发一种能适应长时间运输并提高细胞保存活率的保存液是十分必要的。

针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种细胞保存液，对细胞的生物活性保护理想，保存细胞活率令人满意，能适应长时间运输，本发明另一方面，还提供了一种细胞保存方法及细胞保存液制备方法。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种细胞保存液，包括如下物质：白蛋白、低分子肝素钠、海藻糖和生理盐水。

为保持细胞在长时间保存和运输的生物活性，加入了海藻糖这一种非特异性天然保护剂，海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。

英国大学Camilo.C等详细的研究了海藻糖对DNA限制性内切酶DNA连接酶和DNA聚合酶的保护作用，结果表明，所有加入海藻糖干燥的酶样，在70℃保存35天或在37℃保存9个月后，其活力并无损失，仍能精确的将DNA截断。我国中科院微生物研究所应用海藻糖干燥制备、用于人血清胆固醇测定的三种诊断工具酶，在室温下长期保存后，活性保持率都在90％以上，现已成功的进入于临床应用。这是其它种类的保护剂都不可能达到的效果，利用海藻糖作为诊断工具酶等生物试剂的稳定剂和保护剂，可置于常温条件下干燥并保存。

本发明中的海藻糖可作为血液制品、疫苗、淋巴细胞、细胞组织等生物活性物质的稳定剂。且在室温下长期保存后，活性保持率都在90％以上，这是其它种类的保护剂都不可能达到的效果，利用海藻糖作为生物试剂的稳定剂和保护剂，可置于常温条件下干燥并保存，简化了生物试剂的制备过程。

进一步地，所述白蛋白的浓度为0.01g/ml，低分子肝素钠的浓度为2U/ml，海藻糖的浓度为0.015g/ml，生理盐水的浓度为0.9％。

本发明的另一方面，提供了一种细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：

S1.配置0.1g/ml海藻糖生理盐水溶液；

S2.配置保存液:吸取0.9％生理盐水，依次加入人血白蛋白、肝素钠、步骤S1得到的海藻糖生理盐水溶液混匀。

进一步地，所述步骤S1具体包括如下步骤：称取1.0g海藻糖，加入0.9％生理盐水10ml，混匀，过0.22μm滤网；所述步骤S2具体包括如下步骤：吸取80ml0.9％生理盐水，依次吸取质量体积比为20％的人血白蛋白5ml、12500u/2ml的肝素钠32μl、15ml步骤S1得到的海藻糖生理盐水溶液，混匀,得到100ml细胞保存液。

本发明的另一方面，还提供了一种细胞保存方法，其使用上述的任意一种细胞保存液保存。

本发明的有益效果：本发明所述的细胞保存液，其中，所使用的白蛋白可以使细胞分散，不聚团，肝素钠进一步确保细胞不聚团，抗凝作用，而海藻糖是一种非特异性天然保护剂，具有保护生物组织、细胞和生物大分子的作用，可以很好的保证长时间保存和运输中细胞的生物活性，因此，本发明的细胞保存液对细胞的活力和形态起到优良维持作用，可适应长时间保存和运输，维持其生物特性，并且成分简单，制备方法简洁。

附图说明

为了更清楚地说明发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1是使用本发明实施例所述的细胞保存液保存0h和24h目的细胞占总细胞的比例；