[发明专利]过表达异源谷氨酰胺合成酶的基因工程菌及其构建方法有效
| 申请号： | 201711031742.0 | 申请日： | 2017-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN107603938B | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 谢希贤;李燕军;李娟;陈宁;徐庆阳;张成林;范晓光;马倩 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/77;C12P13/22;C12P13/14;C12R1/23 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 郭晓迪 |
| 地址： | 300222 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 谷氨酰胺 合成 基因工程 及其 构建 方法 | ||
1.过表达异源谷氨酰胺合成酶的谷氨酸棒杆菌基因工程菌，其特征在于，所述谷氨酰胺合成酶来源于嗜酸乳杆菌，其在谷氨酸棒杆菌基因工程菌中的编码基因的序列如SEQ IDNO：2所示；所述基因工程菌的宿主菌为谷氨酸棒杆菌GM34或谷氨酸棒杆菌TP607，表达载体为pXMJ19。
2.权利要求1所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌的用途，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌过表达外源谷氨酰胺合成酶，应用于发酵生产L-谷氨酰胺或L-色氨酸。
3.如权利要求2所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌的用途，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌应用于发酵生产L-谷氨酰胺，5L发酵罐补料分批发酵48h，L-谷氨酰胺的产量达到39±1g/L，和/或达到原宿主菌产量的1.34倍。
4.如权利要求2所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌的用途，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌应用于发酵生产L-色氨酸，摇瓶发酵48h，L-色氨酸产量达到11.4±0.20g/L，和/或达到原宿主菌的1.43倍。
5.如权利要求2所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌的用途，其特征在于，在pH 7.0条件下所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌过表达外源谷氨酰胺合成酶的酶活为620mU，和/或是过表达内源谷氨酰胺合成酶的谷氨酸棒杆菌的3.9倍。
6.权利要求1所述谷氨酸棒杆菌基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)合成并优化来源于嗜酸乳杆菌的谷氨酰胺合成酶基因glnA，基因序列如SEQ IDNO：2所示；
(2)通过酶切连接的方法，将基因glnA连接在大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌穿梭型表达载体pXMJ19上，构建了表达载体pXMJ19glnA；
(3)将表达载体pXMJ19glnA导入谷氨酸棒杆菌GM34或谷氨酸棒杆菌TP607，构建基因工程重组菌GM34/pXMJ19glnA或TP607/pXMJ19glnA。
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