[发明专利]联合诱导内源Lgr5+肝脏干细胞增多的方法及应用

说明书

本申请公开了一种联合诱导内源Lgr5+肝脏干细胞增多的方法及应用，利用可溶性蛋白分子HGF和Rspo1联合诱导内源Lgr5⁺肝脏干细胞增多的方法。所述可溶性配体通过静脉注射到达组织干细胞，通过与受体结合达到激活组织干细胞。所述方法采用Lgr5+肝脏干细胞作为靶标。本发明利用各组织器官内源干细胞的自我更新和多功能分化能力，通过可溶性分子直接刺激活化体内组织器官内源干细胞，从而促进组织器官的自我修复/再生，从应用的简便性和成本的节约性以及安全性考虑，更具有可行性。

技术领域

本发明涉及现代分子生物技术领域，特别涉及一种联合诱导内源Lgr5+肝脏干细胞增多的方法及应用。

背景技术

肝脏是非常重要的消化系统生命器官，它负责调控很多重要生理活动，包括储存肝糖、脂代谢、血浆蛋白分泌、异质物解毒、胆汁分泌等。

肝功能如此多样且重要，一旦肝功能丧失，在数日之内就会引起器官衰竭、继发性低血压、糖尿病、脑损伤甚至死亡。肝脏疾病，例如，肝代谢疾病、暴发性肝功能衰竭、肝炎、肝硬化、肝癌等，在世界范围内是致死的重要原因。

目前，肝脏疾病的治疗现状不容乐观，肝脏透析技术可以短时间应对肝功能丧失威胁，尚无有效的治疗措施能够在肝功能丧失情况下长期维护肝功能。肝移植是目前治疗晚期肝脏疾病的唯一有效手段，但健康肝脏的来源十分有限，大部分肝疾病晚期病人不得不在等待中死去。

肝纤维化是肝脏疾病发展的重要病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生。几乎任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，短期损伤造成的肝纤维化随着肝脏自我修复可以发生逆转，如果损伤因素长期不能去除，纤维化的过程长期持续就会不可逆转，发展成肝硬化乃至肝癌。

因此针对肝纤维化的治疗方法研究将有助于治疗各种原因引起的肝脏疾病，对救治我国人民免受肝脏疾病威胁意义重大。

随着干细胞研究基础理论的快速发展，目前基于干细胞的细胞替代治疗技术受到全世界的关注，胚胎干细胞技术、诱导多能干细胞技术、成体组织干细胞技术等的发展和应用为人类的健康医疗带来新的希望，有望在较短时间内成为一种治疗缺陷型遗传病、组织器官功能损伤/衰竭的重要医疗手段。预计2020年干细胞与再生医学全球市场份额将超过4000亿美元。

目前已经有多个干细胞治疗多种疾病的临床试验。在眼科领域，日本科学家在美国西雅图视觉与眼科研究协会2016年年会上报告了使用诱导多功能干细胞成功进行了眼部干细胞移植术，帮助患者恢复了视力,日本政府于2017年2月1日批准了异体诱导多能干细胞治疗眼疾临床试验；我国中山大学眼科专家刘奕志团队和张康团队利用内源性干细胞原位再生出透明晶状体，首次实现了人体有生理功能的实体组织器官再生，并用于临床治疗先天性白内障，开辟了干细胞修复组织器官的新方向。

在肝脏领域也有显著的研究成果出现，中科院上海生化细胞所惠利健研究组最近报道了可以从人成纤维细胞诱导产生有功能的肝脏细胞，可以应用在小鼠肝脏急性损伤修复模型，有明显效果，并进一步建立基于人源诱导肝脏细胞（hiHep细胞）的生物人工肝系统应用于救治急性肝衰竭猪模型，显著提升了肝衰竭猪的存活率，证明了hiHep细胞临床应用的可能性。

利用干细胞治疗慢性肝纤维化至今尚无报道。本发明研究发现可以通过诱导内源Lgr5阳性肝脏干细胞促进肝脏损伤修复，对肝纤维化有明显抑制效果，为应用干细胞技术治疗肝纤维化提供了理论依据和实验基础。在当前干细胞技术日益成熟、干细胞制品日益规范、干细胞临床应用范围日益广泛、干细胞应用市场日益扩大的背景下，应用干细胞技术治疗肝纤维化有重大的创新性和临床应用前景。

发明内容