[发明专利]稳定化的枯草杆菌蛋白酶组合物

说明书

本发明涉及稳定化的枯草杆菌蛋白酶组合物。具体地，可以使用肽醛向亚硫酸氢盐加合物的转化来增加在肽醛的纯化中的水溶解度。有利的是，这种亚硫酸氢盐加合物本身作为枯草杆菌蛋白酶抑制剂和稳定剂是有效的并且它还可以稳定一种第二酶(如果存在)。该亚硫酸氢盐加合物作为枯草杆菌蛋白酶抑制剂是有效的，并且在储存过程中，它在液体洗涤剂中保持其抑制和稳定化作用。因此，使用该亚硫酸氢盐加合物可以避开将其转化回至肽醛的成本和时间，并且可以省去肽醛的随后干燥，并且这可以避免处理处于粉末形式或作为高度稀释的水溶液的肽醛的不便。

本发明申请是基于申请日为2012年6月29日、申请号为201280033107.5(国际申请号为PCT/EP2012/062760)、名称为“稳定化的枯草杆菌蛋白酶组合物”的发明专利申请的分案申请。

对序列表的引用

本申请包含计算机可读形式的序列表。

技术领域

本发明涉及一种包括枯草杆菌蛋白酶的组合物，该枯草杆菌蛋白酶由一种肽醛衍生物稳定。它还涉及制备该组合物的方法，并且涉及用于在该组合物中使用的化合物。

发明背景

WO 98/13458、WO 94/04651、WO 98/13460、WO 95/25791、以及WO 2009/118375披露了具有由肽醛稳定化的枯草杆菌蛋白酶型的蛋白酶的液体洗涤剂。WO 2011/036153披露向一种微粒状包含枯草杆菌蛋白酶的洗涤剂中添加肽醛可以改进脱垢性。

熟知的是，醛可以与NaHSO₃形成可溶性加合物(重亚硫酸盐或亚硫酸氢盐加合物)并且肽醛趋向于是略微水溶性的。

WO 98/47523和US 6,500,802披露了肽基-2-氨基-1-羟基链烷磺酸及其作为蛋白酶抑制剂的用途。US 5,436,229披露了L-精氨酸醛衍生物的重亚硫酸盐加合物及其作为凝血酶抑制剂的用途。

US 4,703,036、US 4,478,745以及US 5,578,574披露了制备处于干燥形式的肽醛的方法。

发明内容

在稳定化的枯草杆菌蛋白酶组合物的大规模生产中，为了安全性和工艺两者的考虑，强烈优选的是处理液体原料。肽醛趋向于是略微水溶性的，这使得难于或不可能制备浓缩的水溶液并且当制备用于在液体配制品中使用或用于造粒以制备粒状组合物的稳定化枯草杆菌蛋白酶溶液时，必须使用干燥产品亦或高度稀释的水溶液。

可以使用肽醛向亚硫酸氢盐加合物的转化来增加在肽醛的纯化中的水溶解度。有利的是，我们已经发现这一亚硫酸氢盐加合物本身作为枯草杆菌蛋白酶抑制剂和稳定剂是有效的并且发现它还可以稳定一种第二酶(非枯草杆菌蛋白酶)(如果存在)。我们已经发现亚硫酸氢盐加合物作为枯草杆菌蛋白酶抑制剂是有效的，并且我们已经发现在储存过程中，它在液体洗涤剂中保持其抑制和稳定化作用。因此，使用该亚硫酸氢盐加合物可以避开将其转化回至肽醛的成本和时间，并且可以省去肽醛的随后干燥，并且这可以避免处理处于粉末形式或作为高度稀释的水溶液的肽醛的不便。而且，添加肽醛重亚硫酸盐加合物还可以改进包含枯草杆菌蛋白酶的洗涤剂的脱垢性(洗涤性能)。

因此，本发明提供了包括一种枯草杆菌蛋白酶和具有式X-B¹-NH-CHR-CHOH-SO₃M的肽醛亚硫酸氢盐加合物的组合物。在该式中的基团具有以下意义：

a)M是H(氢)或一种碱金属，优选是Na或K；

b)R是一种基团这样使得NH-CHR-CO是L-氨基酸残基或D-氨基酸残基(在下面表示为B⁰)；

c)B¹是一个氨基酸残基；并且