[发明专利]白介素‑6检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的对白介素-6进行定量分析的白介素-6检测试剂盒及其制备方法。

背景技术：

白细胞介素-6，简称白介素6(IL-6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。它是由纤维母细胞、单核/巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞、以及多种瘤细胞所产生。IL-1、TNF-a,PDGF、病毒感染、双链RNA 及c AMP等，均可诱导正常细胞产生白介素6。白介素6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。

其具有诱导B细胞分化、支持浆细胞瘤和骨髓瘤增生、诱导IL-2和IL-2受体表达、诱导单核细胞分化、诱导CTL、增强NK细胞活性、诱导急性期反应分子并刺激肝细胞、诱导神经元分化、诱导肾小球膜细胞生长、诱导角质化细胞生长、抑制细胞凋亡、支持造血干细胞分化等生物特性。

IL-6与IL-1一起可协同地促进T细胞增殖，部分与T细胞IL-2受体上调有关；对IL-3的多向祖细胞刺激作用有协同效果，它还可促使B细胞的分化；IL-6 和IL-1一样参与炎症反应和发热反应，某些人体肿瘤细胞、特别是骨髓瘤细胞，可分泌IL-6作为自身生长因子刺激其生长。

研究表明充血性心力衰竭(congestiveheartfailure,CHF)患者循环及组织中白介素-6(inter-leukin-6,IL-6)升高。持续过度的IL-6产生会破坏细胞因子网络而促进心肌损伤。IL-6可能导致各种不同病因的CHF患者心肌损伤及功能障碍的进展。作为心肌炎、心肌病、移植排斥及左心室辅助装置(LVAD)等情况所致CHF 的原因之一,循环IL-6水平与左室功能障碍的严重程度密切相关,而且是后续严重临床并发症的预测因子。IL-6可能通过IL-6信号转导受体成分—糖蛋白 130(gp130)而导致心脏肥大。IL-6家族在多种心血管疾病病理生理过程中起核心作用。

免疫分析技术是利用微量抗原与相应的高特异性抗体之间的免疫反应，来检测如激素、药物、蛋白质、多肽、酶、肿瘤相关抗原、微生素、病毒、细菌及金属元素等生物体内活性物质。免疫分析技术包括标记免疫分析、非标记免疫分析和仪器免疫分析。本试剂盒利用的含有稀土元素的羧基乳胶微球标记免疫分析技术是属于标记免疫分析之一种。

荧光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自问世以来，经历了几十年的发展，但是人们越来越感觉到FIA因自然本地太高，干扰检测结果；RIA采用同位素标记，对人体有极大危害并给实验带来不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不稳定，受其他影响因素较大，推广应用受到限制。80年代初，人们开始研究用稀土元素代替荧光物质和同位素标记蛋白质或抗体，将时间分辨技术引入到生物检测领域，建立了新型的超微量时间分辨荧光免疫分析技术(Time resolved Fluoroimmunoassay，简称TrFIA)。该技术采用多学科先进技术，集结了其他免疫分析的特点，在免疫学、分子生物学、细胞学和医学等领域，取得长足的发展和广泛应用。

TrFIA利用了具有独特荧光特性的3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧光物质、酶、同位素、化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞，待反应体系(如抗原抗体反应、核酸探针杂交、生物素亲和素反应以及靶细胞对效应细胞的杀伤效应等)发生后，用TrFIA检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。在通常的荧光测定中，由于测试样品中含有多种荧光成分，背景荧光(来自样品中的胶体颗粒和溶剂分子引起的散射光以及血清中蛋白质和其他化合物发出的非特异性荧光)强度大、干扰强，成为荧光分析法大范围推广的瓶颈。TrFIA之所以能够成为继EIA、RIA之后一种新的灵敏的检测方法，主要取决于镧系元素独特的荧光特点、检测中采用的波长分辨和时间延迟技术以及解离-增强技术。