[发明专利]一种水产养殖用半固体微生态制剂的制备方法

权利要求书

1.一种水产养殖用半固体微生态制剂的制备方法，其特征是按重量份计：该微生态制剂为含水30%~35%的半固体制剂，由按液体菌比例，纳豆芽孢杆菌CICC 10454 14~16份、嗜酸乳杆菌CICC 21007 25~32份、醋化醋杆菌CICC 21684 13~17份、酿酒酵母CICC 1005 25~30份和产阮假丝酵母CICC 1769 13~15份混合得到混合菌，在30~35℃发酵温度下以麸皮、次粉和酱油渣为基础制备的固体培养基上发酵80~120h，真空包装得到水产养殖用半固体微生态制剂。

2.如权利要求1所述水产养殖用半固体微生态制剂的制备方法，其特征是所述的固体发酵培养基，其组份比例按重量份数计：麸皮，粗蛋白含量≥15%，48~60份，次粉，粗蛋白含量≥15%，18~23份，酱油渣，粗蛋白含量≥12%，盐份≤6%，18~35份，于室温下混合均匀，于烘箱中100℃灭菌15min，冷却后备用。

3.如权利要求1所述水产养殖用半固体微生态制剂的制备方法，其特征是具体步骤如下：

（1）纳豆芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环纳豆芽孢杆菌（Basillus natto ），CICC 10454，接种到30~100 mL灭菌的肉汤培养基中，于30~32 ℃、100~125 r·min^-1摇床上培养22~30 h，然后将其接入0.8~1 L经灭菌的肉汤培养基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1摇床上培养32~40 h，制成菌种种子液备用，此时菌液的活菌数≥10⁹ CFU· mL^-1；

（2）乳酸杆菌的培养：从试管斜面上取一环嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），CICC 21007，接种到30~100mL灭菌的MRS液体培养基中，于33~37 ℃静置培养32~40h，然后将其接入0.8~1L经灭菌的MRS液体培养基中，于33~37℃静置培养32~40h，制成菌种种子液备用，此时菌液的活菌数≥10⁹ CFU·mL^-1；

（3）酿酒酵母和产朊假丝酵母的培养：分别从试管斜面上取一环酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），CICC 1005和产朊假丝酵母（Candida utilis），CICC 1769，分别接种到30~100 mL灭菌的马铃薯葡萄糖培养基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1摇床上培养22~30 h，然后将其分别接入0.8~1L经灭菌的马铃薯葡萄糖培养基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1摇床上培养22~30h，制成菌种种子液备用，此时菌液的活菌数≥10⁹ CFU· mL^-1；

（4）醋化醋杆菌的培养：从试管斜面上取一环醋化醋杆菌（Acetobacter aceti），CICC21684，接种到30~100mL灭菌的醋酸菌培养基中，于30~32℃、100~125 r·min^-1摇床上培养22~30h，然后将其接入0.8~1L经灭菌的醋酸菌培养基中，于30~32℃、100~125r·min^-1摇床上培养22~30h，制成菌种种子液备用，此时菌液的活菌数≥10⁹ CFU· mL^-1；

（4）混合菌的组合：按重量比，取上述培养至活菌浓度≥10⁹ CFU·mL^-1的纳豆芽孢杆菌14~16份、乳酸杆菌25~32份、酿酒酵母25~30份、产朊假丝酵母13~15份和醋化醋杆菌13~17份，放入经灭菌的25 L桶中混合，备用；

（5）半固体微生物制剂的制备：在50kg的单向透气发酵袋中加入重量为20~30 kg、经100℃灭菌15min后冷却备用的固体发酵培养基，将步骤（4）所得混合菌种4~6L及无菌纯水5~8L加入固体培养基，搅拌均匀，于30~35℃恒温培养室中培养80~120h，待发酵物菌含量≥10⁹ CFU·g^-1、水分含量30~35%时取出，即得水产养殖用半固体微生态制剂。