[发明专利]一种用于比率荧光检测的固定化酶反应器及其制备方法

权利要求书

1.一种用于比率荧光检测的固定化酶反应器，其特征在于：在表面胺基化的介孔二氧化硅纳米颗粒孔道内装载荧光素后，在其表面修饰量子点，其中荧光素和量子点在同一激发波长下必须同时出现两个发射峰；然后包覆一层ZIF-8，形成核壳结构的复合纳米粒子，最后以该核壳结构复合纳米粒子为载体固定化酶，从而得到用于比率荧光检测的固定化酶反应器；

上述量子点为CdTe量子点，其粒径为3～10 nm；

上述的荧光素为5-氨基荧光素；

上述的酶为胆固醇氧化酶；

上述表面胺基化的介孔二氧化硅纳米颗粒的粒径为50～100 nm，其孔道直径小于3nm。

2.一种权利要求1所述的固定化酶反应器的制备方法，其特征在于它由下述步骤组成：

（1）将表面胺基化的介孔二氧化硅纳米颗粒分散于 PBS缓冲液中，并加入荧光素，常温超声分散均匀后搅拌24小时，离心分离，得到装载荧光素的介孔二氧化硅纳米颗粒；

（2）将量子点和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐分散于PBS缓冲液中，常温搅拌20～30分钟，然后加入装载荧光素的介孔二氧化硅纳米颗粒，常温孵化3～4小时，用PBS缓冲液离心洗涤，得到双荧光的介孔二氧化硅纳米颗粒；

（3）将步骤（2）得到的双荧光的介孔二氧化硅纳米颗粒分散于去离子水中，并加入十六烷基三甲基溴化铵，常温搅拌20～30分钟，用甲醇离心洗涤，所得沉淀超声分散于甲醇中，并加入Zn(NO₃)₂∙6H₂O和二甲基咪唑，50 ℃下静置2～3小时，用甲醇离心洗涤，得到双荧光的核壳结构介孔二氧化硅@ZIF-8复合纳米粒子；

（4）将双荧光的核壳结构介孔二氧化硅@ZIF-8复合纳米粒子分散于PBS缓冲液中，然后加入酶，在3～5℃下孵育12～16小时，用PBS缓冲液离心洗涤，得到固载酶的核壳结构复合纳米粒子，即用于比率荧光检测的固定化酶反应器。

3.根据权利要求2所述的固定化酶反应器的制备方法，其特征在于：在步骤（3）中，所述Zn(NO₃)₂∙6H₂O和二甲基咪唑摩尔比为1:1。

4.根据权利要求2所述的固定化酶反应器的制备方法，其特征在于：所述PBS缓冲液的pH=7.4。