[发明专利]一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法

说明书

本发明公开了一种超临界CO₂萃取林蛙卵雌二醇的方法，其方法如下：（1）预处理制得林蛙卵粉，（2）选用超临界CO₂萃取方法进行林蛙卵雌二醇的萃取。本发明使萃取过程充分接触，萃取率高，不添加任何其他成分，雌二醇纯度高、质量好。

技术领域

本发明涉及一种超临界CO₂萃取林蛙卵雌二醇的方法，属于保健食品技术领域。

背景技术

长白山林蛙 （Rana chensinensis Changbaishanen－sis）属中国林蛙长白山亚种，主要在我国的东北长白山和小兴安岭地区有分布，林蛙卵的药理作用研究在国内未见有太多的报道，因其有显著的抑制血小板聚集、降血脂及降低过氧化脂质含量等相关作用，所以被认为是一种天然的优质的保健食品原料，有相关资料报道，林蛙卵中含有 18 种氨基酸其中必需氨基酸的总量可达到 28.93 %、富含雌二醇孕酮等，是中国药典中收录的重要名贵中药之一。

雌激素可缓解或消除绝经前后引起的更年期症状，可保护神经元，对改善骨密度，预防骨质疏松具有一定的作用，此外，雌激素还能增加大脑皮质血液的供应，雌二醇是雌激素中的生物活性最强的一种激素，林蛙卵常常被废弃，我们从废弃的原料中提取有很大利用价值的雌二醇鲜见有相关文献报道。

超临界萃取技术因其提取温度低，尤其适宜于提取热敏性有效成分；传质速率快，萃取率高；相对与传统方法工艺流程简单，因此便于过程中的调节；惰性无毒，产品中没有溶剂残留，从萃取到分离可以一步完成，萃取后的 CO₂不会残留在萃取物上，且比较容易从产物中进行分离出来，基于以上的特点，超临界萃取的应用范围越来越广泛。

酶联免疫测定法具有快速、灵敏、特异、简便等优点，同时还具有检测成本低，便于大批量样品检测等特点，因此具有广泛的实际应用价值。

本文中采用超临界CO₂流体萃取林蛙卵雌二醇，研究萃取压力、温度、CO₂流量和萃取时间对萃取得率的影响，并用酶联免疫分析进行检测，为林蛙卵雌二醇的实际应用提供理论指导和实验依据。

发明创造内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种超临界CO₂萃取林蛙卵雌二醇的方法，使萃取过程充分接触，萃取率高，不添加任何其他成分，雌二醇纯度高、质量好。

本发明是通过如下技术方案予以实现的：

一种超临界CO₂萃取林蛙卵雌二醇的方法，其方法如下：

（1）预处理

试验原料为长白山新鲜林蛙卵，经干燥粉碎处理后备用；

（2）超临界CO₂萃取

准确称取4550g干燥粉碎后的林蛙卵粉装入料筒，将料筒装入萃取缸，装上料筒 O型圈再放入通气环，盖好压环及上堵头，进行萃取试验；在林蛙卵雌二醇萃取过程中选取萃取压力 15、20、25、30、35 MPa，萃取温度 37、42、47、52、57 ℃，CO2流量 8、10、12、14、16 kg/h和萃取时间 30、60、90、120、150 min，以林蛙卵雌二醇的萃取得率为考察指标，进行单因素试验；雌二醇萃取得率按下列公式计算：得率 =（提取物质量/林蛙卵粉质量）×100 %；

（3）酶联免疫分析（ELISA）检测超临界 CO₂萃取林蛙卵中雌二醇的含量