[发明专利]利用茶叶愈伤组织悬浮培养提取制备花青素的方法

权利要求书

1.一种利用茶叶愈伤组织悬浮培养提取制备花青素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

A、选生长旺盛的茶树，取新梢上第3片展开叶，灭菌后切成小块；

B、将切得的小块叶片转入愈伤组织培养基中培养，每2周更换一次愈伤组织培养基；其中，愈伤组织培养基的组成为：2.2g/L MS盐+0.05-0.2mg/L噻苯隆+0.05-0.10mg/L吲哚丁酸+0.10-0.20mg/L赤霉素+20.0g/L蔗糖+6g/L琼脂粉，培养条件为：21℃，10小时光照、14小时黑暗，光照强度1200lux，相对湿度70-85％；

C、待培养出现红色愈伤组织并长到体积为0.8-1.2立方厘米时，将其切碎成边长为0.08-0.12毫米的小方块，按愈伤组织：悬浮培养基为1：100的体积比，将愈伤组织转入悬浮培养基中振动培养4周；其中，悬浮培养基的组成为：4.4g/L MS盐+0.05-0.2mg/L噻苯隆+0.05-0.10mg/L吲哚丁酸+0.10-0.20mg/L赤霉素+25.0g/L蔗糖，培养条件为：29℃，16小时光照、8小时黑暗，光照强度3000lux，相对湿度为70-85％，振动速度100-110rpm；

D、悬浮培养后，转入诱导培养基中震荡培养1周；其中，诱导培养基的组成为：1.1g/LMS盐+0.12mg/L噻苯隆+0.08mg/L吲哚丁酸+15.0g/L蔗糖+0.8-1.2g/L二氢杨梅素；培养条件为：20℃，12小时光照、12小时黑暗，光照强度4000lux，相对湿度70-85％，振动速度90-100rpm；

E、诱导培养后收集悬浮培养细胞，干燥后粉碎至100mu，然后于悬浮培养细胞中加入0.7-1.5％体积浓度的盐酸乙醇溶液于55-65℃超声提取2-3次，每次提取条件为：超声功率200-300w，时间30-50min，每1g悬浮培养细胞加20-50ml盐酸乙醇溶液；合并提取液，真空浓缩直至溶剂全部挥干，得到花青素产品。

2.如权利要求1所述的利用茶叶愈伤组织悬浮培养提取制备花青素的方法，其特征在于，所述步骤A中的茶树品种为尖波黄、碧香早或福鼎大白。

3.如权利要求1所述的利用茶叶愈伤组织悬浮培养提取制备花青素的方法，其特征在于，所述步骤A中的灭菌是指将茶叶以1％体积浓度的次氯酸钠水溶液浸泡18-20min，取出，用灭菌水冲洗干净后用无菌风吹干，无菌条件下将叶片切成小块。