[发明专利]一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒的培养方法

权利要求书

1.一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.取长成单层的CHSE细胞，经胰酶消化后用细胞培养液中和，振摇分散细胞，调整细胞浓度；按4×10⁸cells/mL的量转接种到含微载体的生物反应器中进行培养，培养条件为：培养温度16-20℃，5％CO₂，pH值在7.0-7.5之间，葡萄糖含量不低于330mg/dL，溶氧为40％-60％，搅拌速度为40-60rpm；

S2.待步骤S1中细胞密度达到2×10⁶cells/mL细胞时，按体积比1：1000的比例接种含IHNV病毒毒种，并加入细胞生长液，每隔5分钟进行搅拌，16-20℃孵育15-45分钟，然后设置反应器参数：培养温度为16-20℃，5％CO₂，维持pH值在7.0-7.5之间，葡萄糖含量不低于450mg/dL，溶氧为40％-60％和搅拌速度30-50rpm，进行持续培养。

2.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，所用生物反应器为自动化搅拌生物反应器。

3.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，所用微载体为球形微载体，使用密度为6g/L。

4.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，所用胰酶为0.125％胰酶。

5.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，所述细胞培养液由85-92％MEM培养液、2-5％葡萄糖、6-10％胎牛血清、1-3mg/L氯化胆碱和0.2-0.6mg/L次黄嘌呤组成。

6.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，所用毒种中IHNV病毒含量为10⁷TCID₅₀。

7.根据权利要求1所述鱼类传染性造血器官坏死病病毒悬浮培养的方法，其特征在于，细胞生长液由90-95％MEM培养液、2-5％葡萄糖和3-5％新生小牛血清组成。