[发明专利]LDLR基因突变体及其应用

权利要求书

1.一种分离的编码LDLR基因突变体的核酸，其特征在于，该核酸包括下列目标片段，所述目标片段与SEQ NO：1相比，具有下列的突变：c.C2164T。

2.一种分离的多肽，其特征在于，与SEQ ID NO:2相比，所述分离的多肽具有下列的突变：p.Q722X。

3.一种非诊断和治疗目的筛选易感高胆固醇血症的生物样品的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)从待检测生物样品提取核酸样本；

(2)以步骤(1)中的核酸样本为模板特异性扩增LDLR基因，回收纯化扩增产物，并确定所述扩增产物的核酸序列；

(3)判断步骤(2)所述核酸序列与SEQ ID NO:1相比，是否具有c.C2164T突变，若有，则步骤(1)中所述的生物样品即为易感高胆固醇血症的生物样品。

4.一种非诊断和治疗目的筛选易感高胆固醇血症的生物样品的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)从待检测生物样品提取总蛋白样本；

(2)确定步骤(1)所述总蛋白样本中LDLR基因表达的多肽；

(3)判断步骤(2)所述多肽与SEQ ID NO:2相比，是否具有下列的突变：p.Q722X，若有，则步骤(1)中的生物样品即为易感高胆固醇血症的样品。

5.一种检测高胆固醇血症的生物样品的试剂盒，其特征在于，含有适于检测LDLR基因突变体的试剂，所述LDLR基因突变体为权利要求1中所述的核酸。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为核酸探针或引物。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示。

8.一种构建体，其特征在于，包含权利要求1所述的分离的编码LDLR突变体的核酸。

9.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求8所述的构建体转化受体细胞获得的。

10.一种用于制备预防或治疗高胆固醇血症的药物的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白由权利要求9所述的重组细胞表达。

11.一种用于制备预防或治疗高胆固醇血症的药物的重组蛋白，其特征在于，由以下步骤获得：

(1)构建含有权利要求1所述的分离的编码LDLR突变体的核酸的重组腺病毒；

(2)将步骤(1)所述的重组腺病毒酶切后获得两末端是ITR序列的线性双链DNA，将所述线性双链DNA转染到包装细胞中；

(3)所述重组腺病毒在包装细胞内成熟后,收集包装细胞和培养液；反复冻融包装细胞和培养液的混合物，离心收集上清，获得粗病毒；

(4)将步骤(3)所述的粗病毒重新感染包装细胞，当包装细胞出现病变斑时，收集包装细胞；反复冻融包装细胞，离心收集上清，并将上清转导细胞或组织，获得制备预防或治疗高胆固醇血症的药物的重组蛋白。