[发明专利]具有生物安全性的病原菌样品前处理方法有效
申请号: | 201711044956.1 | 申请日: | 2017-10-31 |
公开(公告)号: | CN107917950B | 公开(公告)日: | 2021-01-05 |
发明(设计)人: | 肖迪;张建中 | 申请(专利权)人: | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 |
主分类号: | G01N27/64 | 分类号: | G01N27/64;G01N1/38 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君;陈征 |
地址: | 102206 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 具有 生物 安全性 病原菌 样品 处理 方法 | ||
1. 一种具有生物安全性的、适用于MALDI-TOF MS检测的病原菌样品前处理方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)试剂A在样本制备套管上部的滤膜管中悬浮待测病原菌样品, 8000~16000g离心1~10min后样本制备套管下部的收集管中液体即为MALDI-TOF MS检测上样前微生物的蛋白样本,所述试剂A为50~90%甲酸和80~100%乙腈的等体积混合液,所述滤膜管的滤膜孔径范围在0.003~0.2μm;其中,试剂A与待测微生物样本的体积质量比为10~50ul:1mg;
(2)步骤(1)得到的蛋白样本直接检测或冻干备用;若直接检测,则将其加入质谱样本靶上,干燥后,按与蛋白样本的体积比1:1在样品上覆盖基质,所述基质为α-氢基-4-羟基肉桂酸在1~5%三氟乙酸和40~60%乙腈水溶液中的过饱和液;
步骤(2)中,若蛋白样本冻干备用,则再用于质谱检测前,需用试剂A进行溶解。
2.如权利要求1所述的病原菌样品前处理方法,其特征在于,离心条件均为13000g,离心5min。
3.如权利要求1所述的病原菌样品前处理方法,其特征在于,病原菌样品用量为0.5-5mg。
4.如权利要求1-3任一所述的病原菌样品前处理方法,其特征在于,试剂A与待测病原菌样本的体积质量比为20ul:1mg。
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